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sujing200309

新虫 (初入文坛)

[求助] PH3.8的固体培养基如何配置??急!

The indicator medium contained 0.67%  (w/v) Difco Bacto  Yeast  Nitrogen  Base  without  amino  acids;  15.0% (w/v) glucose;  1.0%  (w/v) L-malic acid  and  0.0022%  (w/v) bromocresol  green.  These  components  were  combined  in
2 x solution.  The  pH  was  adjusted  to  3.8  with  KOH.  This solution  and  an  equal  volume  of a  4%  agar  solution  were  autoclaved  separately  at  121~  for  15 rain.  The  two  solutions were mixed before plates were poured.
请问这个培养基怎么配置呀?pH比较低,先调节了pH到3.8,加入了4%的琼脂直接配的,但是效果不好,培养基放置久了会开裂。这个文献中说是要分开配置,但是琼脂那一部分没有注明调节pH,那么混到一起pH还是会变,如果把琼脂那部分也调节pH到3.8,同样在高温下会发生水解,导致琼脂不凝固。大家都是怎么配这种培养基的呢?
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alimar

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
sujing200309: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-10-26 20:08:53
在琼脂含量为2%时,影响琼脂凝固的主要因素为pH值,当pH值低于4时,琼脂失去凝固能力。当配制的固体培养基pH低于3.44时,其凝固性会受到灭菌温度、灭菌时间、琼脂量和瀀H值的影响。其中灭菌温度、灭菌时间与琼脂凝固性呈负相关,琼脂量、pH值与琼脂凝固性呈正相关。可参考:
http://wenku.baidu.com/view/33357414f18583d049645902.html
4楼2013-10-24 14:13:15
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fish81

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助! 2013-10-23 22:37:02
sujing200309: 金币+1 2013-10-26 20:09:27
看文中的意思应该是pH3.8的培养基溶液和4%的琼脂溶液分开灭菌后,再等体积量混合在一起. 所以最终的琼脂应该是2%的浓度. 你的培养基开裂应该是琼脂量太多的原因.
2楼2013-10-23 16:57:37
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sujing200309

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by fish81 at 2013-10-23 16:57:37
看文中的意思应该是pH3.8的培养基溶液和4%的琼脂溶液分开灭菌后,再等体积量混合在一起. 所以最终的琼脂应该是2%的浓度. 你的培养基开裂应该是琼脂量太多的原因.

那pH怎么调节呢?琼脂溶液的pH要用HCL直接调节到3.8吗?那不还是会水解,不能凝固。
3楼2013-10-23 18:06:01
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fish81

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


sujing200309: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-10-26 20:09:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by sujing200309 at 2013-10-23 18:06:01
那pH怎么调节呢?琼脂溶液的pH要用HCL直接调节到3.8吗?那不还是会水解,不能凝固。...

既然文中未提4%  agar  solution 需要调节PH值,是否可以忽略混合在一起PH值的变化. 高温会发生水解的话, 等温度降到45度倒平板之前再混合呢,可以试试. 不放心的话,混合好的培养液,可取出少量测其PH值看看.
5楼2013-10-25 13:13:43
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