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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » PH3.8的固体培养基如何配置？？急！
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sujing200309

新虫 (初入文坛)

[求助] PH3.8的固体培养基如何配置？？急！

The indicator medium contained 0.67%  (w/v) Difco Bacto  Yeast  Nitrogen  Base  without  amino  acids;  15.0% (w/v) glucose;  1.0%  (w/v) L-malic acid  and  0.0022%  (w/v) bromocresol  green.  These  components  were  combined  in
2 x solution.  The  pH  was  adjusted  to  3.8  with  KOH.  This solution  and  an  equal  volume  of a  4%  agar  solution  were  autoclaved  separately  at  121~  for  15 rain.  The  two  solutions were mixed before plates were poured.
请问这个培养基怎么配置呀？pH比较低，先调节了pH到3.8，加入了4%的琼脂直接配的，但是效果不好，培养基放置久了会开裂。这个文献中说是要分开配置，但是琼脂那一部分没有注明调节pH，那么混到一起pH还是会变，如果把琼脂那部分也调节pH到3.8，同样在高温下会发生水解，导致琼脂不凝固。大家都是怎么配这种培养基的呢？
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1楼 2013-10-23 11:23:32
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fish81

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
sujing200309: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-10-26 20:09:15
引用回帖:
3楼: Originally posted by sujing200309 at 2013-10-23 18:06:01
那pH怎么调节呢？琼脂溶液的pH要用HCL直接调节到3.8吗？那不还是会水解，不能凝固。...

既然文中未提4%  agar  solution 需要调节PH值,是否可以忽略混合在一起PH值的变化. 高温会发生水解的话, 等温度降到45度倒平板之前再混合呢,可以试试. 不放心的话,混合好的培养液,可取出少量测其PH值看看.
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5楼2013-10-25 13:13:43
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fish81

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-10-23 22:37:02
sujing200309: 金币+1 2013-10-26 20:09:27
看文中的意思应该是pH3.8的培养基溶液和4%的琼脂溶液分开灭菌后,再等体积量混合在一起. 所以最终的琼脂应该是2%的浓度. 你的培养基开裂应该是琼脂量太多的原因.
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2楼2013-10-23 16:57:37
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alimar

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
sujing200309: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-10-26 20:08:53
在琼脂含量为2%时，影响琼脂凝固的主要因素为pH值，当pH值低于4时，琼脂失去凝固能力。当配制的固体培养基pH低于3.44时，其凝固性会受到灭菌温度、灭菌时间、琼脂量和瀀H值的影响。其中灭菌温度、灭菌时间与琼脂凝固性呈负相关，琼脂量、pH值与琼脂凝固性呈正相关。可参考：
http://wenku.baidu.com/view/33357414f18583d049645902.html
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4楼2013-10-24 14:13:15
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普通回帖

sujing200309

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fish81 at 2013-10-23 16:57:37
看文中的意思应该是pH3.8的培养基溶液和4%的琼脂溶液分开灭菌后,再等体积量混合在一起. 所以最终的琼脂应该是2%的浓度. 你的培养基开裂应该是琼脂量太多的原因.

那pH怎么调节呢？琼脂溶液的pH要用HCL直接调节到3.8吗？那不还是会水解，不能凝固。
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3楼2013-10-23 18:06:01
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sujing200309

新虫 (初入文坛)
感谢大家！已经解决了。
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6楼2013-10-26 20:07:56
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liuxia123

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
7楼2013-11-06 00:15:33
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紫莹

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by sujing200309 at 2013-10-26 20:07:56
感谢大家！已经解决了。

怎么解决的啊？
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8楼2013-11-06 21:15:49
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紫莹

新虫 (初入文坛)
怎么解决的？
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9楼2013-11-06 21:16:02
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至爱传统

铁虫 (初入文坛)
怎么解决的？
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与时间赛跑。
10楼2014-06-28 20:23:41
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