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[求助]
看看咱这个电泳图，菜鸟根本不懂。。
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普通凝胶电泳图，三个2000的mark，目的片段630左右，用的PCR引物GC-341f和907r，PCR条件为 94 ℃预变性 5min；接下来是 94 ℃变性 30 s，50 ℃退火 30 s，72 ℃延伸 1 min，30 个循环；72 ℃延伸 10 min，最后 4 ℃保温。 PCR体系为50ul。引物浓度为0.4umol/L。其他的酶、dNTP、和镁离子都是买的混合好的。大家帮我看下我这个是怎么回事，我接下来想做DGGE。 问题1：这个电泳图胶有没有问题，出现这个样子是什么原因啊。 问题2：目的条带位置是对的，想知道后面那些东西是什么？ 问题3：接下来是要做DGGE的，这样有没有影响，是否需要重新进行PCR，重新进行的话应该如何调整。 希望大家可以指导我一下，师兄没有做的，独自摸索，望得到指导。问题可能有点菜，希望大家不要介意，耐心解答。  Image9.jpg |
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6楼2013-10-21 14:37:13
2楼2013-10-21 09:48:18
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhouyangjue: 金币+4 2013-10-21 11:52:54
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-10-23 16:09:00
zhouyangjue: 金币+4 2013-10-30 11:39:53
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zhouyangjue: 金币+4 2013-10-30 11:39:53
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不能说帮助，只能是说尽我所能帮你看看~ 问题一、就结果而言，这个电泳图没有问题，因为你要的结果出来了630，你的目的条带很明显，出现这个样子的原因包括很多。结合问题二，原因可能是循环数过高，退火温度可能有点低，模板和引物的配比可能有点高等，详情可以搜索PCR扩增出现非特异性条带（杂带）的原因。 问题二、目的条带位置对的，后面的阴影是非特异性目的条带，也就是所谓的杂带。后面那个白色的拖带不是太影响。 问题三、就目的而言，可以做DGGE，但是可能效果不好，因为杂带的影响。会导致结果误差。建议优化下PCR实验条件，使得干菜那个图只有清晰的特异性条带，没有杂带和二聚体等其他的影响因素。这样做DGGE效果会最好。而且很容易得出你需要的实验结论。否则效果不好判别。 希望对你有帮助…… |
3楼2013-10-21 11:12:53
4楼2013-10-21 11:13:13
