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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提质粒，跑电泳发现量很少怎么回事？
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天湖酒

新虫 (初入文坛)

[求助] 提质粒，跑电泳发现量很少怎么回事？

我就是用试剂盒，按照说明书提的质粒，是两个菌的两个质粒一起提的，会有哪些可能导致提的质粒量很少呢？
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1楼 2013-10-11 20:43:37
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20083630zhan

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待更详细的解答 2013-10-11 22:36:45
操作的方法，不是说你按照说明书上操作就可以，提取的过程中速度要快，在这就是混匀的时候动作要尽量轻柔，不要剧烈混匀，
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2楼2013-10-11 21:18:34
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是高拷贝质粒还是低拷贝质粒？收的菌生长状态如何？
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3楼2013-10-11 23:54:09
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929519755

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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1、菌体数量多少
2、试剂盒是否过期
3、操作是否正确
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想你没话说
4楼2013-10-12 08:39:23
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

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还有，跑电泳的时候，拿标准跑对照了吗？ 直接测一下，浓度多少，260/280的比例如何
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行至水穷处，坐看云起时
5楼2013-10-12 11:59:14
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liyongliangx

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
分析一下：你量少有两个原因，一，可能是质料本身就少；二，你提的过程中操作不好。
给你的建议是：一，可以多提点菌液，比如原来你只用了1ML的菌液，那现在你可以用3ml 5ml 甚至更多。只要重复的离心菌液就行了。
                     二，操作过程中，动作要温和，其中加碱和酸的这两步比较关键，可能试剂盒里有不同的名字比如QIA的叫P2,N3 ，天根的好像是叫P2,P3。 加碱上下颠倒几次，要轻柔。时间不要超过3min ，然后加酸中和就行了。

                     三，最后你就得检查下你的试剂盒是不是有问题，比如 wash buffer 是不是没有问题的。
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6楼2013-10-12 16:25:10
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沙门小rna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
原因：菌体种类，摇菌的毫升数，以及你的质粒拷贝数是一个。举例：
我提的是pbad-hisa/myc,从20ml的菌液中提质粒，40微升溶解质粒，浓度为103ng/μl，我不会贴图要么就可以吧图给你看看了。
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应助之星就是我~没错。你没有看错~
7楼2013-10-12 20:13:25
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王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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天湖酒: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2013-10-13 17:15:13
原因：1 菌体的类型，表达菌株的质粒量就很少；
2 试剂盒上的要求很重要，裂解菌体是否充分很重要，菌体过多就需要多加裂解液，否则质粒产量就会很低；
3 过柱时可放置5min，便于膜吸附质粒；
4  洗脱质粒时可重复洗两次。
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坚持不懈,终会成功!
8楼2013-10-12 21:53:34
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