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hedyzero

铁虫 (初入文坛)

[求助] 乳酸乳球菌提出来的质粒电泳后位置不对,酶切后完全消失!

最近实验很是不顺,各位大虾帮忙分析下!

做乳酸菌的转化,转完以后挑克隆菌液过夜培养后PCR鉴定,有很亮的目的条带,当时想着转进去了,刚好保菌,雅安地震就直接回家了。五一回来后重新复苏,但是用菌液PCR时目的条带变得很弱。觉得不对,就又重新涂的板子,虽然长的菌很多,但是颜色都没变(阳性应该变黄色),就一度认为是没转进去!后来又重新做感受态电转了几次都没能成功,一直到现在都快两个月了,急死了快。。

昨天重新把过夜菌液PCR鉴定了次,跟地震回来的情况一样,也是条带很弱。今天就提质粒准备酶切鉴定。质粒提出来跑电泳的时候,发现虽然有条带但是位置不对,载体加目的片段总共3000多点,但是质粒的位置比4500的marker还高。接着就直接酶切了,电泳时候发现完全没有了条带,而且把昨天的PCR鉴定也一起跑,加的量是昨天的三倍,但是条带还没有昨天的亮!!!真的很诡异!!!!

这种状况是怎么个意思啊?大家赐教!!!!!
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