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hedyzero

铁虫 (初入文坛)

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[求助] 乳酸乳球菌提出来的质粒电泳后位置不对，酶切后完全消失！

最近实验很是不顺，各位大虾帮忙分析下！

做乳酸菌的转化，转完以后挑克隆菌液过夜培养后PCR鉴定，有很亮的目的条带，当时想着转进去了，刚好保菌，雅安地震就直接回家了。五一回来后重新复苏，但是用菌液PCR时目的条带变得很弱。觉得不对，就又重新涂的板子，虽然长的菌很多，但是颜色都没变（阳性应该变黄色），就一度认为是没转进去！后来又重新做感受态电转了几次都没能成功，一直到现在都快两个月了，急死了快。。

昨天重新把过夜菌液PCR鉴定了次，跟地震回来的情况一样，也是条带很弱。今天就提质粒准备酶切鉴定。质粒提出来跑电泳的时候，发现虽然有条带但是位置不对，载体加目的片段总共3000多点，但是质粒的位置比4500的marker还高。接着就直接酶切了，电泳时候发现完全没有了条带，而且把昨天的PCR鉴定也一起跑，加的量是昨天的三倍，但是条带还没有昨天的亮！！！真的很诡异！！！！

这种状况是怎么个意思啊？大家赐教！！！！！

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