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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 配跑western blot的胶无法凝固成胶
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 配跑western blot的胶无法凝固成胶

最近开始做western blot，我是用的TEMED来交联的，之前几次配的胶都还挺好的，10min左右就能成胶，但最近几天配出来，发现stacking gel和resolving gel都要几个小时才能成胶，有时候甚至都成不了胶，不知道各位高手有什么解决办法没？
在此先谢过了
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1楼 2013-09-25 11:37:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
诺曼底1227: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-09-26 06:18:53
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-26 09:22:13
引用回帖:
4楼: Originally posted by 诺曼底1227 at 2013-09-25 20:29:30
我们是买的TEMED，没有用过硫酸氨...

过硫酸铵提供交联时所需自由基，是催化剂。TEMED是底物。如果不加催化剂，交联非常缓慢。通常配制SDS-PAGE时两者都要加的。
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7楼2013-09-26 03:48:39
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走过三月

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+5, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-25 15:41:21
诺曼底1227: 金币+1, ★有帮助 2013-09-25 20:29:50
过硫酸铵是现用现配的么
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2楼2013-09-25 13:40:58
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-25 15:41:32
诺曼底1227: 金币+1, ★有帮助 2013-09-25 20:30:12
1.过硫酸铵一定要现用现配。
2.温度，室温低于25度的话，凝胶较慢，可以放到37度凝的快些。
3.胶浓度的影响，胶浓度低，凝的慢。
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3楼2013-09-25 13:49:48
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 走过三月 at 2013-09-25 13:40:58
过硫酸铵是现用现配的么

我们是买的TEMED，没有用过硫酸氨
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4楼2013-09-25 20:29:30
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