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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 配跑western blot的胶无法凝固成胶
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] 配跑western blot的胶无法凝固成胶

最近开始做western blot，我是用的TEMED来交联的，之前几次配的胶都还挺好的，10min左右就能成胶，但最近几天配出来，发现stacking gel和resolving gel都要几个小时才能成胶，有时候甚至都成不了胶，不知道各位高手有什么解决办法没？
在此先谢过了
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1楼 2013-09-25 11:37:58
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走过三月

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
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myprayer: 金币+5, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-25 15:41:21
诺曼底1227: 金币+1, ★有帮助 2013-09-25 20:29:50
过硫酸铵是现用现配的么
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2楼2013-09-25 13:40:58
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hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-09-25 15:41:32
诺曼底1227: 金币+1, ★有帮助 2013-09-25 20:30:12
1.过硫酸铵一定要现用现配。
2.温度，室温低于25度的话，凝胶较慢，可以放到37度凝的快些。
3.胶浓度的影响，胶浓度低，凝的慢。
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3楼2013-09-25 13:49:48
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 走过三月 at 2013-09-25 13:40:58
过硫酸铵是现用现配的么

我们是买的TEMED，没有用过硫酸氨
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4楼2013-09-25 20:29:30
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-25 13:49:48
1.过硫酸铵一定要现用现配。
2.温度，室温低于25度的话，凝胶较慢，可以放到37度凝的快些。
3.胶浓度的影响，胶浓度低，凝的慢。

首先我是用的bio rad的TEMED。配的是12%的胶。温度这块我有想过，但还没试。'
多谢了
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5楼2013-09-25 21:05:03
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sc5921041

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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诺曼底1227: 金币+2, ★有帮助 2013-09-26 06:18:43
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-26 15:55:00
I think AP and TEMED are both required for making a gel...
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nostalgia
6楼2013-09-25 23:49:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
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诺曼底1227: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-09-26 06:18:53
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-09-26 09:22:13
引用回帖:
4楼: Originally posted by 诺曼底1227 at 2013-09-25 20:29:30
我们是买的TEMED，没有用过硫酸氨...

过硫酸铵提供交联时所需自由基，是催化剂。TEMED是底物。如果不加催化剂，交联非常缓慢。通常配制SDS-PAGE时两者都要加的。
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7楼2013-09-26 03:48:39
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-26 03:48:39
过硫酸铵提供交联时所需自由基，是催化剂。TEMED是底物。如果不加催化剂，交联非常缓慢。通常配制SDS-PAGE时两者都要加的。...

哦，不好意思，我刚查了一下，原来过硫酸铵的英文单词是Ammonium persulfate，才发现配胶时确实加了这个。我想问一下啊，这种试剂在4度能保存多久？因为我怀疑是这试剂的原因。
多谢
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8楼2013-09-26 06:18:31
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sc5921041

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-09-26 15:55:12
引用回帖:
8楼: Originally posted by 诺曼底1227 at 2013-09-25 17:18:31
哦，不好意思，我刚查了一下，原来过硫酸铵的英文单词是Ammonium persulfate，才发现配胶时确实加了这个。我想问一下啊，这种试剂在4度能保存多久？因为我怀疑是这试剂的原因。
多谢...

四度应该能放很久，但是问题是经常有人用过后就忘记放回去。 我的建议是一次少配一点放在四度， 当然现用现配最好。
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nostalgia
9楼2013-09-26 06:22:16
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诺曼底1227

铁杆木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by sc5921041 at 2013-09-26 06:22:16
四度应该能放很久，但是问题是经常有人用过后就忘记放回去。 我的建议是一次少配一点放在四度， 当然现用现配最好。...

我们都没有自己配，是买bio-rad的，是30%的，但放在4度有5年了。不知道这还能不能用
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10楼2013-09-26 06:44:59
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