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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 生物效应评价 » 求助各位是如何将细胞接种在膜上的
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fistwl

新虫 (小有名气)

[求助] 求助各位是如何将细胞接种在膜上的

材料做成膜之后要将细胞接种在上面测增殖，但是我尝试了好几次结果都很差。
第一次是直接材料打成48孔板大小，然后用硅胶环压住，加上200ul细胞悬液，结果发现细胞都会流到膜和板子之间，而且每个孔流的还不一样。
第二次是在第一次基础上改进了一下，将细胞悬液稀释到400ul，这样即使流下去，细胞数目也少。结果不行
第三次是将细胞浓缩在10ul里，小心加在膜中间，过1.5小时后，小心补足培养液，这次我满以为会好，结果还是不行，SD值很大
各位都是如何操作了，还请指教
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1楼2013-09-23 09:58:19
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Xiang_cai145

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2013-09-23 20:03:23
我做的时候用的24孔板，膜要比空小一圈，然后用50微升。4个小时后补培养基，感觉除了长得不均匀外，其他还可以。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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2楼2013-09-23 11:12:21
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淘气百合

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2013-09-23 20:03:31
先把细胞悬液接种到材料上培养一天，第二天把材料换一个孔继续培养，细胞就在材料上了
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3楼2013-09-23 13:20:06
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夏南

金虫 (正式写手)

深度强迫症患者

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2013-09-24 20:40:59
为什么加那么少的细胞悬液？
建议材料大小和孔的大小最好差不多，适当增加细胞悬液的量，可以多稀释一点然后多加点嘛，我们都是加1ml的。
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假装文艺青年的科技工作者。
6楼2013-09-24 01:18:25
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fistwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 夏南 at 2013-09-24 10:01:53
24孔板每个孔4X10的4次方个细胞。
我们的膜是做在钛合金上的，不会飘起来，
不想让飘起来不是很随意，弄个双面胶粘到孔底不就行了。...

双面胶.......会有细胞毒性的吧
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9楼2013-09-25 17:25:29
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普通回帖

淘气百合

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Xiang_cai145 at 2013-09-23 11:12:21
我做的时候用的24孔板，膜要比空小一圈，然后用50微升。4个小时后补培养基，感觉除了长得不均匀外，其他还可以。

要看你的材料细胞能不能黏附上去
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4楼2013-09-23 13:21:08
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fistwl

新虫 (小有名气)
可以粘附的,我看过细胞骨架染色
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5楼2013-09-23 19:26:35
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fistwl

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 夏南 at 2013-09-24 01:18:25
为什么加那么少的细胞悬液？
建议材料大小和孔的大小最好差不多，适当增加细胞悬液的量，可以多稀释一点然后多加点嘛，我们都是加1ml的。

哇,你们加细胞的话,细胞量是多大?
你们是如何让膜不飘起来的
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7楼2013-09-24 09:42:25
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夏南

金虫 (正式写手)

深度强迫症患者

【答案】应助回帖

★
markar: 金币+1, 感谢回帖交流！ 2013-09-24 20:41:27
引用回帖:
7楼: Originally posted by fistwl at 2013-09-24 09:42:25
哇,你们加细胞的话,细胞量是多大?
你们是如何让膜不飘起来的...

24孔板每个孔4X10的4次方个细胞。
我们的膜是做在钛合金上的，不会飘起来，
不想让飘起来不是很随意，弄个双面胶粘到孔底不就行了。
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假装文艺青年的科技工作者。
8楼2013-09-24 10:01:53
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ruinyan

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
红舟流星: 金币+1, 应助指数+1, 专家考核, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-09-27 23:56:40
引用回帖:
7楼: Originally posted by fistwl at 2013-09-24 09:42:25
哇,你们加细胞的话,细胞量是多大?
你们是如何让膜不飘起来的...

我们通常用铝箔纸把膜包裹起来（上面只包裹边缘露出中间部分进行培养）。
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10楼2013-09-27 14:48:16
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