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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 天然生物材料 » 【求助】求助细胞支架材料的灭菌及细胞向支架材料上的接种方法
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mzlfengye

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】求助细胞支架材料的灭菌及细胞向支架材料上的接种方法

求助求助！细胞支架材料大家都用什么方法灭菌啊？具体步骤是什么？还有就是细胞往支架材料上接种是怎么进行的？一般多长时间就可以看到细胞有没有接种上去啊？我采用75%酒精灭菌，接种后培养36h后发现，培养液变黄、混浊，用倒置显微镜也看不到支架上有没有细胞啊？不过感觉好像没有哦！这到底是怎么回事啊？是污染了吗？怎么支架上会没有一点点细胞呢，我接种量挺大的。而且，换液后，发现培养液中有许多小沫沫，好像是支架被分解的，具体我也搞不清楚。另外，我用的是蛋白支架，这种支架Biomaterials上好多文献都有报道的。但我的怎么会出现这样的情况，着急啊！请各位大侠帮帮忙！
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1楼 2010-09-07 13:21:42
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kaobochiren

木虫 (著名写手)
★
americanyk(金币+1):Thank you 2010-09-07 08:09:48
mzlfengye(金币+1):我是把材料泡在酒精里消毒后，又在PBS中泡着，在净化台的紫外灯下辐照杀菌的啊！ 2010-09-07 15:10:57
从你描述的情况看应该是杀菌不好！被污染了！酒精的杀菌效果是有限的，不能做到完全杀菌！比较好的方法有高温杀菌，紫外杀菌。如果材料性质允许你可以用紫外杀菌2h，效果会好一些！
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2楼2010-09-07 14:38:01
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wwgfz

铁杆木虫 (著名写手)
★
mzlfengye(金币+1):谢谢你，不过我的支架制备过程应该还好，主要是不清楚75%酒精泡30min后紫外2h能达到无菌吗？ 2010-09-09 18:28:37
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:53
你的结果上看，肯定是染菌了。

呵呵，你要更具体点，什么蛋白支架。你的蛋白支架可以泡酒精而不变形？可以采用环氧乙烷吗？文献中如果都是采用酒精灭菌的话，你可以尝试在制备支架的时候，把蛋白溶液过滤，把交联剂也过滤，然后可能会好一点。
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3楼2010-09-09 11:54:53
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aegeansyang

银虫 (正式写手)
★
mzlfengye(金币+1):谢谢你啊！ 2010-09-10 13:49:45
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:47
首先肯定是污染了，如果肉眼看到浑浊的话，显微镜下应该看到蠕动的菌；细胞估计是全部死亡了，细菌感染后，细胞完全被裂解了。所以你看不到细胞。

灭菌的话，紫外照射加乙醇浸泡

如果要观察细胞的话，一般接种1-2小时后观察一下，细胞应该贴附了。但是，由于你用的是支架材料，表面不平的话，一般显微镜也难以观察到细胞。可以做个简单的荧光染色，在荧光显微镜下观察。
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4楼2010-09-10 09:28:01
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milk5852

禁虫 (著名写手)
★
mzlfengye(金币+1):我正在试着改进灭菌条件，实在不行就得去四医大照Co60…… 2010-09-10 13:50:42
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:39
本帖内容被屏蔽
5楼2010-09-10 09:37:18
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ff1983

金虫 (小有名气)
★
mzlfengye(金币+1):细胞要想粘附材料表面必须要光滑？我是自己制作的多孔支架材料，表面怎么能保证光滑啊？？？？？？？？ 2010-09-14 09:42:41
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:31
75%的酒精按道理来讲是不能彻底杀菌的，如果你的材料允许的话可以考虑紫外照射30min-1h.细胞要想粘附材料表面必须要光滑。
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6楼2010-09-11 09:12:54
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dongchao

金虫 (小有名气)
★
mzlfengye(金币+1):谢谢啊！ 2010-09-14 09:43:04
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:25
钴60照射灭菌较好,只有灭菌好并且培养环境好才可以考虑细胞的生长问题.否则染菌后一切只有重新开始.
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7楼2010-09-13 09:42:32
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