24小时热门版块排行榜    

查看: 3028  |  回复: 6

mzlfengye

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】求助细胞支架材料的灭菌及细胞向支架材料上的接种方法

求助求助!细胞支架材料大家都用什么方法灭菌啊?具体步骤是什么?还有就是细胞往支架材料上接种是怎么进行的?一般多长时间就可以看到细胞有没有接种上去啊?我采用75%酒精灭菌,接种后培养36h后发现,培养液变黄、混浊,用倒置显微镜也看不到支架上有没有细胞啊?不过感觉好像没有哦!这到底是怎么回事啊?是污染了吗?怎么支架上会没有一点点细胞呢,我接种量挺大的。而且,换液后,发现培养液中有许多小沫沫,好像是支架被分解的,具体我也搞不清楚。另外,我用的是蛋白支架,这种支架Biomaterials上好多文献都有报道的。但我的怎么会出现这样的情况,着急啊!请各位大侠帮帮忙!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kaobochiren

木虫 (著名写手)


americanyk(金币+1):Thank you 2010-09-07 08:09:48
mzlfengye(金币+1):我是把材料泡在酒精里消毒后,又在PBS中泡着,在净化台的紫外灯下辐照杀菌的啊! 2010-09-07 15:10:57
从你描述的情况看应该是杀菌不好!被污染了!酒精的杀菌效果是有限的,不能做到完全杀菌!比较好的方法有高温杀菌,紫外杀菌。如果材料性质允许你可以用紫外杀菌2h,效果会好一些!
2楼2010-09-07 14:38:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wwgfz

铁杆木虫 (著名写手)


mzlfengye(金币+1):谢谢你,不过我的支架制备过程应该还好,主要是不清楚75%酒精泡30min后紫外2h能达到无菌吗? 2010-09-09 18:28:37
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:53
你的结果上看,肯定是染菌了。

呵呵,你要更具体点,什么蛋白支架。你的蛋白支架可以泡酒精而不变形?可以采用环氧乙烷吗?文献中如果都是采用酒精灭菌的话,你可以尝试在制备支架的时候,把蛋白溶液过滤,把交联剂也过滤,然后可能会好一点。
3楼2010-09-09 11:54:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aegeansyang

银虫 (正式写手)


mzlfengye(金币+1):谢谢你啊! 2010-09-10 13:49:45
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:47
首先肯定是污染了,如果肉眼看到浑浊的话,显微镜下应该看到蠕动的菌;细胞估计是全部死亡了,细菌感染后,细胞完全被裂解了。所以你看不到细胞。

灭菌的话,紫外照射加乙醇浸泡

如果要观察细胞的话,一般接种1-2小时后观察一下,细胞应该贴附了。但是,由于你用的是支架材料,表面不平的话,一般显微镜也难以观察到细胞。可以做个简单的荧光染色,在荧光显微镜下观察。
4楼2010-09-10 09:28:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

milk5852

禁虫 (著名写手)


mzlfengye(金币+1):我正在试着改进灭菌条件,实在不行就得去四医大照Co60…… 2010-09-10 13:50:42
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:39
本帖内容被屏蔽

5楼2010-09-10 09:37:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ff1983

金虫 (小有名气)


mzlfengye(金币+1):细胞要想粘附材料表面必须要光滑?我是自己制作的多孔支架材料,表面怎么能保证光滑啊???????? 2010-09-14 09:42:41
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:31
75%的酒精按道理来讲是不能彻底杀菌的,如果你的材料允许的话可以考虑紫外照射30min-1h.细胞要想粘附材料表面必须要光滑。
6楼2010-09-11 09:12:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongchao

金虫 (小有名气)


mzlfengye(金币+1):谢谢啊! 2010-09-14 09:43:04
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:25
钴60照射灭菌较好,只有灭菌好并且培养环境好才可以考虑细胞的生长问题.否则染菌后一切只有重新开始.
7楼2010-09-13 09:42:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 mzlfengye 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +3 68gx6bh3ei 2026-07-09 3/150 2026-07-10 06:33 by pbuc7it0i8
[硕博家园] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +3 ph7bxbho8f 2026-07-09 3/150 2026-07-10 05:53 by j4frgf6zcw
[教师之家] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +3 al9t2f50x3 2026-07-09 4/200 2026-07-10 05:33 by j4frgf6zcw
[考研] 售T0P一区SCI文章,我:8O5.51.O.54,科目齐全,可+急 +4 al9t2f50x3 2026-07-09 4/200 2026-07-10 05:33 by j4frgf6zcw
[基金申请] b口会评 +6 当空照 2026-07-08 6/300 2026-07-09 20:49 by tonyliu0401
[基金申请] 信息学部会评时间 +3 xuel2011 2026-07-06 3/150 2026-07-09 19:05 by mollyzhang_2003
[基金申请] 祈祷青基必中 50+3 hadengry 2026-07-09 9/450 2026-07-09 17:37 by 文杰猪猪
[考研] 在职考研 +6 wu5d 2026-07-08 7/350 2026-07-09 16:40 by 化工小霸王呀
[论文投稿] MSER送审了还被拒稿 +3 S778950906 2026-07-08 5/250 2026-07-09 15:46 by S778950906
[基金申请] 关于如何从代码看上不上会 +11 且听虎啸 2026-07-09 14/700 2026-07-09 15:27 by libeny
[有机交流] 硝基还原 20+3 暮年飞雪 2026-07-07 5/250 2026-07-09 13:30 by tfang
[基金申请] 化学口会评?应用基础研究和基础研究,希望能分开 +3 Tide man 2026-07-08 3/150 2026-07-09 11:36 by dede5556
[基金申请] 今年E04面上 +15 布布和一二 2026-07-05 21/1050 2026-07-09 10:25 by 学员fOzRO9
[硕博家园] 大龄残疾硕士的一点执念 +14 3776737374 2026-07-06 22/1100 2026-07-09 06:07 by lovechizi
[基金申请] 生命口会评 +4 wuke100666 2026-07-07 4/200 2026-07-08 16:38 by 逍遥不够自在
[教师之家] 网络举报学术不端成为了男女之间情杀的手段了,真荒唐。。。 +3 zju2000 2026-07-04 3/150 2026-07-07 21:00 by hyx552200
[有机交流] Suzuki偶联中硼酸酯原料掉下的硼酸酯是否可以自身偶联,生成B2Pin2杂质 500+3 天下大同 2026-07-06 3/150 2026-07-07 10:31 by martyr_oyx
[论文投稿] 刑法学论文投稿求助 +3 高源678 2026-07-04 5/250 2026-07-06 12:20 by 平天尺
[论文投稿] Journal of Environmental Chemical Engineering +3 雪花天涯 2026-07-05 3/150 2026-07-06 09:00 by bobvan
[基金申请] 最后一年,祈求好运 +3 pyw1992 2026-07-06 3/150 2026-07-06 08:53 by 苏_frp
信息提示
请填处理意见