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mzlfengye

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助】求助细胞支架材料的灭菌及细胞向支架材料上的接种方法

求助求助!细胞支架材料大家都用什么方法灭菌啊?具体步骤是什么?还有就是细胞往支架材料上接种是怎么进行的?一般多长时间就可以看到细胞有没有接种上去啊?我采用75%酒精灭菌,接种后培养36h后发现,培养液变黄、混浊,用倒置显微镜也看不到支架上有没有细胞啊?不过感觉好像没有哦!这到底是怎么回事啊?是污染了吗?怎么支架上会没有一点点细胞呢,我接种量挺大的。而且,换液后,发现培养液中有许多小沫沫,好像是支架被分解的,具体我也搞不清楚。另外,我用的是蛋白支架,这种支架Biomaterials上好多文献都有报道的。但我的怎么会出现这样的情况,着急啊!请各位大侠帮帮忙!
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kaobochiren

木虫 (著名写手)


americanyk(金币+1):Thank you 2010-09-07 08:09:48
mzlfengye(金币+1):我是把材料泡在酒精里消毒后,又在PBS中泡着,在净化台的紫外灯下辐照杀菌的啊! 2010-09-07 15:10:57
从你描述的情况看应该是杀菌不好!被污染了!酒精的杀菌效果是有限的,不能做到完全杀菌!比较好的方法有高温杀菌,紫外杀菌。如果材料性质允许你可以用紫外杀菌2h,效果会好一些!
2楼2010-09-07 14:38:01
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wwgfz

铁杆木虫 (著名写手)


mzlfengye(金币+1):谢谢你,不过我的支架制备过程应该还好,主要是不清楚75%酒精泡30min后紫外2h能达到无菌吗? 2010-09-09 18:28:37
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:53
你的结果上看,肯定是染菌了。

呵呵,你要更具体点,什么蛋白支架。你的蛋白支架可以泡酒精而不变形?可以采用环氧乙烷吗?文献中如果都是采用酒精灭菌的话,你可以尝试在制备支架的时候,把蛋白溶液过滤,把交联剂也过滤,然后可能会好一点。
3楼2010-09-09 11:54:53
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aegeansyang

银虫 (正式写手)


mzlfengye(金币+1):谢谢你啊! 2010-09-10 13:49:45
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:47
首先肯定是污染了,如果肉眼看到浑浊的话,显微镜下应该看到蠕动的菌;细胞估计是全部死亡了,细菌感染后,细胞完全被裂解了。所以你看不到细胞。

灭菌的话,紫外照射加乙醇浸泡

如果要观察细胞的话,一般接种1-2小时后观察一下,细胞应该贴附了。但是,由于你用的是支架材料,表面不平的话,一般显微镜也难以观察到细胞。可以做个简单的荧光染色,在荧光显微镜下观察。
4楼2010-09-10 09:28:01
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milk5852

禁虫 (著名写手)


mzlfengye(金币+1):我正在试着改进灭菌条件,实在不行就得去四医大照Co60…… 2010-09-10 13:50:42
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:39
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5楼2010-09-10 09:37:18
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ff1983

金虫 (小有名气)


mzlfengye(金币+1):细胞要想粘附材料表面必须要光滑?我是自己制作的多孔支架材料,表面怎么能保证光滑啊???????? 2010-09-14 09:42:41
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:31
75%的酒精按道理来讲是不能彻底杀菌的,如果你的材料允许的话可以考虑紫外照射30min-1h.细胞要想粘附材料表面必须要光滑。
6楼2010-09-11 09:12:54
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dongchao

金虫 (小有名气)


mzlfengye(金币+1):谢谢啊! 2010-09-14 09:43:04
yusen_1982(金币+1):欢迎讨论 2010-09-20 22:10:25
钴60照射灭菌较好,只有灭菌好并且培养环境好才可以考虑细胞的生长问题.否则染菌后一切只有重新开始.
7楼2010-09-13 09:42:32
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