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铁虫 (初入文坛)

[求助] 跑hplc在10min内出峰

有一个样品是在硅胶上用石油醚:乙酸乙酯=4:1洗脱:下来的,在薄层上用石油醚乙酸乙酯冰乙酸210.01展开,Rf值在0.5的时候有一个斑点,365nm下没有荧光,254nm下有暗斑。
在液相上用C18柱 洗脱剂走的是等度 甲醇水,但是比例从30%到80%都试过,总是只在前10min内出峰,用100%甲醇冲洗液有峰,请问下这种情况是不是这个样品不适合C18柱,我应该换个什么柱子,大概是个什么样的化合物,为什么这么容易被洗脱?
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乘风牧云

木虫 (职业作家)

--

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这么久都没人回答,我来试试吧,薄层那个比例我没看明白,是否是2:1:0.01?应该你分离到的不是一个峰,因为硅胶洗脱时候用的石油醚乙酸乙酯系统,说明化合物极性应该很小,在C18柱子上应该出峰会比较晚,甚至会很晚,也许那个100%冲柱子出来的峰时你的峰之一,所以建议走个梯度看看,另外薄层为何不显色呢?可以提供更多的信息前10min的峰保留时间是多少?检测波长是多少?
乘长风以牧青云
2楼2013-09-24 13:01:35
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bfsn7942

金虫 (著名写手)

白发

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
把甲醇换成乙腈走下试试。
有志者,事竟成,破釜沉舟,百二秦关终属楚;苦心人,天不负,卧薪尝胆,三千越甲可吞吴。
3楼2013-09-24 14:16:07
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260919368

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不知道你分析一次的时间是多少?感觉你的物质峰还没有洗脱出来,推测物质极性小,很可能没有洗脱下来(如果在洗柱子时有出溶剂外的高峰话)。最好做一下全波长扫描,确定最大吸收波长。其实你完全可以做一个梯度的洗脱,这样分离效果会好些。
4楼2013-09-25 08:49:40
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ever_lijuan

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

能大概知道的是哪一类物质吗?如黄酮类或别的,这样的话可以再适当选择洗脱剂,以确定流动相。
5楼2013-09-26 08:44:16
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小兰赵

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

先用5-95的甲醇或乙腈30min梯度跑一下,看看是在哪个时间点出峰,估算相应的醇的比例,然后等度看看。很好用的哦。而且还可以查看有无杂质。
6楼2013-09-26 14:30:07
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