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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 琼脂糖电泳rna ，跑成这样，是怎么回事？求指导
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键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)
键盘上的脚丫: 回帖置顶 2013-08-20 18:06:56
引用回帖:
6楼: Originally posted by longrna at 2013-08-20 10:08:01
贝类？建议先查找资料看是否有人提取过同类型的样品。
有些样品的RNA并不是都3条带的。我提取只有一条带的物种，也有一些其28非常弱，基本不可见。
你可以电泳时点一个正常样品（动物肝脏或水稻）的total RNA
ma ...

这是我中午测得od值，看到曲线之后，我大概知道自己做错了那些，在此提给大家，望大家引以为戒。

由图可得：
1、编号1、2的两个样品都是属于提出了RNA， 但是里面的量太少。
2、编号3、4、5、6这四个样品，都出现双峰，很明显之前操作的时候，没有把酒精晾干，同时，降解也是比较厉害的，不能达到反转录的要求。

改进措施：
1、晾干酒精，一定要去除
2、操作要迅速，可以先把1ml的tirzol和小钢珠先准备好，再加入样品，迅速研磨，减少RNA降解的量
3、取贝的组织的时候，要小心，不要把生殖腺搞破，里面有很多让RNA降解的酶。
4、在加入depc水制的75%酒精之后，应该是轻轻的上下摇晃两次，而不是剧烈震荡。

以上是小弟的总结，望各大虫指点~ 谢谢~
琼脂糖电泳rna ，跑成这样，是怎么回事？求指导
测OD.PNG
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11楼2013-08-20 18:01:03
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longrna

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 键盘上的脚丫 at 2013-08-20 12:20:43
恩恩，我准备去测一下od值先，下午再跑一次电泳，谢谢吖...

测OD也无法判断呵，只能大概看看纯度和产量什么的。
应该是样品本身RNA就长这个样子。
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伟大航线....
12楼2013-08-21 12:08:58
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键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by longrna at 2013-08-21 12:08:58
测OD也无法判断呵，只能大概看看纯度和产量什么的。
应该是样品本身RNA就长这个样子。...

嗯，主要是RNA降解了…
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13楼2013-08-22 00:56:14
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石头雪儿

金虫 (正式写手)
匀浆的话，最好还是用液氮吧，这样处理温度低，耗时短，有利于防止RNA酶的作用，从你跑的胶上来看，好像是降解了吧，一般情况下是能看到三条带的
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14楼2013-08-25 15:06:31
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键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 石头雪儿 at 2013-08-25 15:06:31
匀浆的话，最好还是用液氮吧，这样处理温度低，耗时短，有利于防止RNA酶的作用，从你跑的胶上来看，好像是降解了吧，一般情况下是能看到三条带的

嗯，因为只是做毕业课题，所以，用匀浆器方便点，不用准备那么久。

后面我查找了原因，主要是我加的样品过量，导致其降解。

那个图是我后面重新提取的RNA的电泳图，OD值都不错，浓度也好。
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15楼2013-08-26 23:44:33
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huayueyang

新虫 (小有名气)
RNA降解，鉴定完毕。、
外源RNA酶清除剂，处理一下台面，仪器，吸头离心管，电泳槽。

研磨时液氮和巯基乙醇抑制内源性RNA酶活性很有帮组。
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坚持！
16楼2013-09-07 11:25:49
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随波逐刘

新虫 (小有名气)
样品量是多少，太多了容易降解的。。。跑RNA的时候电压高点，200V吧，时间短点，10-15min可以了
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17楼2013-09-07 16:08:14
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huayueyang

新虫 (小有名气)
各种降解啊。得用外源RNA酶清除剂处理一下。
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坚持！
18楼2013-09-24 16:35:15
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村小姑

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by 键盘上的脚丫 at 2013-08-20 18:01:03
这是我中午测得od值，看到曲线之后，我大概知道自己做错了那些，在此提给大家，望大家引以为戒。

由图可得：
1、编号1、2的两个样品都是属于提出了RNA， 但是里面的量太少。
2、编号3、4、5、6这四个样品，都 ...

我想问下，你做的时候酒精真的是晾的一点都没有了么、？我一般都是晾不干   在超净工作台上晾
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19楼2013-12-07 13:07:45
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shizixiaoe

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 15879003030 at 2013-08-19 21:13:38
附上我这里跑RNA的图

rna.jpg
...

你好，我想问一下你跑RNA电泳时电泳槽、缓冲液、loadingbuffer这些都用depc处理过吗？loadingbuffer怎么用depc 处理啊？我后面也要做这个实验，想提前搞清楚，谢谢您回复。
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20楼2016-03-17 22:59:35
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