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键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)

键盘上的脚丫: 回帖置顶 2013-08-20 18:06:56
引用回帖:
6楼: Originally posted by longrna at 2013-08-20 10:08:01
贝类?建议先查找资料看是否有人提取过同类型的样品。
有些样品的RNA并不是都3条带的。我提取只有一条带的物种,也有一些其28非常弱,基本不可见。
你可以电泳时点一个正常样品(动物肝脏或水稻)的total RNA
ma ...

这是我中午测得od值,看到曲线之后,我大概知道自己做错了那些,在此提给大家,望大家引以为戒。

由图可得:
1、编号1、2的两个样品都是属于提出了RNA, 但是里面的量太少。
2、编号3、4、5、6这四个样品,都出现双峰,很明显之前操作的时候,没有把酒精晾干,同时,降解也是比较厉害的,不能达到反转录的要求。

改进措施:
1、晾干酒精,一定要去除
2、操作要迅速,可以先把1ml的tirzol和小钢珠先准备好,再加入样品,迅速研磨,减少RNA降解的量
3、取贝的组织的时候,要小心,不要把生殖腺搞破,里面有很多让RNA降解的酶。
4、在加入depc水制的75%酒精之后,应该是轻轻的上下摇晃两次,而不是剧烈震荡。

以上是小弟的总结,望各大虫指点~ 谢谢~
琼脂糖电泳rna ,跑成这样,是怎么回事?求指导
测OD.PNG

11楼2013-08-20 18:01:03
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longrna

新虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 键盘上的脚丫 at 2013-08-20 12:20:43
恩恩,我准备去测一下od值先,下午再跑一次电泳,谢谢吖...

测OD也无法判断呵,只能大概看看纯度和产量什么的。
应该是样品本身RNA就长这个样子。
伟大航线....
12楼2013-08-21 12:08:58
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键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by longrna at 2013-08-21 12:08:58
测OD也无法判断呵,只能大概看看纯度和产量什么的。
应该是样品本身RNA就长这个样子。...

嗯,主要是RNA降解了…
13楼2013-08-22 00:56:14
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石头雪儿

金虫 (正式写手)

匀浆的话,最好还是用液氮吧,这样处理温度低,耗时短,有利于防止RNA酶的作用,从你跑的胶上来看,好像是降解了吧,一般情况下是能看到三条带的
14楼2013-08-25 15:06:31
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键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 石头雪儿 at 2013-08-25 15:06:31
匀浆的话,最好还是用液氮吧,这样处理温度低,耗时短,有利于防止RNA酶的作用,从你跑的胶上来看,好像是降解了吧,一般情况下是能看到三条带的

嗯,因为只是做毕业课题,所以,用匀浆器方便点,不用准备那么久。

后面我查找了原因,主要是我加的样品过量,导致其降解。

那个图是我后面重新提取的RNA的电泳图,OD值都不错,浓度也好。

15楼2013-08-26 23:44:33
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huayueyang

新虫 (小有名气)

RNA降解,鉴定完毕。、
外源RNA酶清除剂,处理一下台面,仪器,吸头离心管,电泳槽。

研磨时液氮和巯基乙醇抑制内源性RNA酶活性很有帮组。
坚持!
16楼2013-09-07 11:25:49
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随波逐刘

新虫 (小有名气)

样品量是多少,太多了容易降解的。。。跑RNA的时候电压高点,200V吧,时间短点,10-15min可以了
17楼2013-09-07 16:08:14
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huayueyang

新虫 (小有名气)

各种降解啊。得用外源RNA酶清除剂处理一下。
坚持!
18楼2013-09-24 16:35:15
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村小姑

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by 键盘上的脚丫 at 2013-08-20 18:01:03
这是我中午测得od值,看到曲线之后,我大概知道自己做错了那些,在此提给大家,望大家引以为戒。

由图可得:
1、编号1、2的两个样品都是属于提出了RNA, 但是里面的量太少。
2、编号3、4、5、6这四个样品,都 ...

我想问下,你做的时候酒精真的是晾的一点都没有了么、?我一般都是晾不干   在超净工作台上晾
19楼2013-12-07 13:07:45
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shizixiaoe

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 15879003030 at 2013-08-19 21:13:38
附上我这里跑RNA的图

rna.jpg
...

你好,我想问一下你跑RNA电泳时电泳槽、缓冲液、loadingbuffer这些都用depc处理过吗?loadingbuffer怎么用depc 处理啊?我后面也要做这个实验,想提前搞清楚,谢谢您回复。
20楼2016-03-17 22:59:35
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