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键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)

[求助] 琼脂糖电泳rna ,跑成这样,是怎么回事?求指导

Sample Text

我做的是马氏珠母贝的外套膜和边缘膜的RNA的提取

操作步骤是这样的:
1、样品早上10点从贝中提取出来,接着在液氮中冻存并保存了4个小时
2、下午2点做,用于depc处理过的2微升管取样并加入tirzol  1ml,加入小钢珠,用匀浆器匀浆8分钟
3、用镊子取出小钢珠,放置5min
4、加入氯仿200微升,涡旋30s
4、12000r,4℃,15min
5、吸取上清400微升于depc处理过的1.5ml离心管中,异丙醇400微升
6、室温放置10min
7、12000r,4℃,10min
8、弃去上清,加入1ml 的75%depc配置的乙醇,剧烈震荡
9、12000r,4℃,5min
10、在垂直层流操作台晾干10min,加入20微升的depc水溶解(没有pcr ,也没有测过其浓度,师姐说不用,测没意义)。
11、琼脂糖凝胶电泳 ,其余样品-80℃保存。
12、琼脂糖凝胶的配置:
        凝胶浓度:1%   
       电压:120V
       电流:60MA
       跑的时间:30min
缓冲液:0.5xTBE
琼脂糖电泳rna ,跑成这样,是怎么回事?求指导
RNA电泳图.PNG

[ Last edited by 键盘上的脚丫 on 2013-8-19 at 20:53 ]
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键盘上的脚丫

金虫 (小有名气)

引用回帖:
14楼: Originally posted by 石头雪儿 at 2013-08-25 15:06:31
匀浆的话,最好还是用液氮吧,这样处理温度低,耗时短,有利于防止RNA酶的作用,从你跑的胶上来看,好像是降解了吧,一般情况下是能看到三条带的

嗯,因为只是做毕业课题,所以,用匀浆器方便点,不用准备那么久。

后面我查找了原因,主要是我加的样品过量,导致其降解。

那个图是我后面重新提取的RNA的电泳图,OD值都不错,浓度也好。

15楼2013-08-26 23:44:33
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15879003030

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
这是RNA吗?少了一条带啊。

为什么不用热酚法抽RNA,你这个方法我没用过不知道效果。
2楼2013-08-19 21:06:37
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15879003030

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 15879003030 at 2013-08-19 21:06:37
这是RNA吗?少了一条带啊。

为什么不用热酚法抽RNA,你这个方法我没用过不知道效果。

附上我这里跑RNA的图
琼脂糖电泳rna ,跑成这样,是怎么回事?求指导-1
rna.jpg

3楼2013-08-19 21:13:38
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-20 18:34:33
和抽提没有太大关系,样品已降解。你用的方法是公司的标准方法。但是,建议 8、中剧烈震荡。改为轻轻上下翻转2次。
Let'sdoit.
4楼2013-08-19 21:44:21
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