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键盘上的脚丫金虫 (小有名气)
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琼脂糖电泳rna ，跑成这样，是怎么回事？求指导
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Sample Text 我做的是马氏珠母贝的外套膜和边缘膜的RNA的提取 操作步骤是这样的： 1、样品早上10点从贝中提取出来，接着在液氮中冻存并保存了4个小时 2、下午2点做，用于depc处理过的2微升管取样并加入tirzol 1ml，加入小钢珠，用匀浆器匀浆8分钟 3、用镊子取出小钢珠，放置5min 4、加入氯仿200微升，涡旋30s 4、12000r，4℃，15min 5、吸取上清400微升于depc处理过的1.5ml离心管中，异丙醇400微升 6、室温放置10min 7、12000r，4℃，10min 8、弃去上清，加入1ml 的75%depc配置的乙醇，剧烈震荡 9、12000r，4℃，5min 10、在垂直层流操作台晾干10min，加入20微升的depc水溶解（没有pcr ，也没有测过其浓度，师姐说不用，测没意义）。 11、琼脂糖凝胶电泳 ，其余样品-80℃保存。 12、琼脂糖凝胶的配置： 凝胶浓度：1% 电压：120V 电流：60MA 跑的时间：30min 缓冲液：0.5xTBE  RNA电泳图.PNG [ Last edited by 键盘上的脚丫 on 2013-8-19 at 20:53 ] |
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键盘上的脚丫
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键盘上的脚丫: 回帖置顶 2013-08-20 18:06:56
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这是我中午测得od值，看到曲线之后，我大概知道自己做错了那些，在此提给大家，望大家引以为戒。 由图可得： 1、编号1、2的两个样品都是属于提出了RNA， 但是里面的量太少。 2、编号3、4、5、6这四个样品，都出现双峰，很明显之前操作的时候，没有把酒精晾干，同时，降解也是比较厉害的，不能达到反转录的要求。 改进措施： 1、晾干酒精，一定要去除 2、操作要迅速，可以先把1ml的tirzol和小钢珠先准备好，再加入样品，迅速研磨，减少RNA降解的量 3、取贝的组织的时候，要小心，不要把生殖腺搞破，里面有很多让RNA降解的酶。 4、在加入depc水制的75%酒精之后，应该是轻轻的上下摇晃两次，而不是剧烈震荡。 以上是小弟的总结，望各大虫指点~ 谢谢~  测OD.PNG |
11楼2013-08-20 18:01:03
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4楼2013-08-19 21:44:21
