| 查看: 341 | 回复: 0 | |||
[求助]
土壤DNA提成这样，哪里出问题了
|
|
提取步骤： 5 g土样中加入13.5 mL CTAB取缓冲液（100 mmol/L Tris, 100 mmol/LEDTA, 100mmol/LNa3PO4, 1.5 mol/L NaCl, 1% CTAB, pH8.0），混匀后加入100 μL蛋白酶K（25 mg/mL）和200 μL溶菌酶（50 mg/mL, pH 8. 0），37 ℃水浴30 min，每隔10 min颠倒混匀. 加入2 mL 20% SDS，65 ℃水浴2 h，每隔10 min颠倒混匀. 8 000 r/min室温离心15 min，取上清，用等体积氯仿:异戊醇=24:1抽提（颠倒混匀15 min , 静置10 min, 10 000 rpm 15 min）两次，水相中加入0.6倍体积的异丙醇-20 ℃沉淀过夜，过夜后，离心 10 000 rpm 15 min, 发现有较多蛋白沉淀，又重复氯仿异戊醇抽提一次，0.6倍体积的异丙醇-20℃沉淀30 min, 10 000 rpm 15 min, 加入200 ulTE缓冲液,由此得到下图。 问题：1. 那些异丙醇沉淀后的大量的白色沉淀是什么？CTAB与多糖的复合体？还是蛋白？蛋白都抽提好几次了 不至于吧 2. 这些个杂质可不可以在提的过程中除去，而不需要在提完以后对DNA进行纯化的？求方法  er.png |
回复此楼» 猜你喜欢
谈谈两天一夜的“延安行”
已经有6人回复
-
博士申请都是内定的吗？
已经有12人回复
-
氨基封端PDMS和HDI反应快速固化
已经有11人回复
-
之前让一硕士生水了7个发明专利，现在这7个获批发明专利的维护费可从哪儿支出哈？
已经有11人回复
-
论文投稿求助
已经有4人回复
-
Applied Surface Science 这个期刊。有哪位虫友投过的能把word模板发给我参考一下嘛
已经有3人回复
-
投稿精细化工
已经有6人回复
找到一些相关的精华帖子，希望有用哦~
土壤DNA功能基因的遗传多样性研究
已经有9人回复- 土壤微生物DNA提取不出来，是什么原因？
已经有19人回复
- 周集中提土壤dna方法中20%SDS需要调ph值吗
已经有8人回复
- 土壤DNA提取，真菌通用引物PCR，琼脂糖电泳图，感觉有问题，新手求助
已经有7人回复
- 提取土壤微生物总DNA用什么试剂盒？
已经有17人回复
- 提取土壤DNA时如何配制CTAB缓冲液？
已经有4人回复
- Qiagen（MOBIO）土壤、血液、水样、植物、粪便、组织细胞DNA/RNA提取试剂盒
已经有614人回复
- 提取土壤DNA，如何去除腐殖质等PCR抑制物？
已经有17人回复
- 用土壤DNA提取试剂盒提出的浓度有多大
已经有10人回复
- 土壤中含有农药，提取的土壤DNA进行PCR扩增，农药会抑制PCR反应吗
已经有5人回复
- 土壤微生物总DNA提取试剂盒选购
已经有29人回复
- 土壤总DNA提取步骤中，加入异丙醇后，静置，出现分层，求助高手
已经有13人回复
- 【求助/交流】土壤总DNA的离心柱纯化问题
已经有15人回复
点击这里搜索更多相关资源科研从小木虫开始，人人为我，我为人人