提取步骤: 5 g土样中加入13.5 mL CTAB取缓冲液(100 mmol/L Tris, 100 mmol/LEDTA, 100mmol/LNa3PO4, 1.5 mol/L NaCl, 1% CTAB, pH8.0),混匀后加入100 μL蛋白酶K(25 mg/mL)和200 μL溶菌酶(50 mg/mL, pH 8. 0),37 ℃水浴30 min,每隔10 min颠倒混匀. 加入2 mL 20% SDS,65 ℃水浴2 h,每隔10 min颠倒混匀. 8 000 r/min室温离心15 min,取上清,用等体积氯仿:异戊醇=24:1抽提(颠倒混匀15 min , 静置10 min, 10 000 rpm 15 min)两次,水相中加入0.6倍体积的异丙醇-20 ℃沉淀过夜,过夜后,离心 10 000 rpm 15 min, 发现有较多蛋白沉淀,又重复氯仿异戊醇抽提一次,0.6倍体积的异丙醇-20℃沉淀30 min, 10 000 rpm 15 min, 加入200 ulTE缓冲液,由此得到下图。
问题:1. 那些异丙醇沉淀后的大量的白色沉淀是什么?CTAB与多糖的复合体?还是蛋白?蛋白都抽提好几次了 不至于吧
2. 这些个杂质可不可以在提的过程中除去,而不需要在提完以后对DNA进行纯化的?求方法
![土壤DNA提成这样,哪里出问题了]()
er.png |