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26号

新虫 (初入文坛)

[求助] srap引物筛选

俺是这个月才开始做分子实验的，毕业论文就是做遗传多样性。对于srap引物筛选的流程不是很清楚，也请教过一些师兄师姐，意见不一。（1）有的说可以先找一个固定的pcr体系来筛选几对引物，筛选出较好的引物后，利用这几对引物来重新筛选出一个很好的pcr体系，利用完善的pcr体系再去筛选500多对引物。（2）先用一对或者两对引物来设计筛选完善的pcr体系，再利用这个体系来筛选500多对引物。
    实践出真知，俺就用了第一种方法，同一份DNA，找了一个近缘科的pcr体系，用了5对引物，但是只有一对引物出现条带，觉得有点郁闷，究竟是什么原因呢？是引物的问题？还是pcr体系的问题？还是DNA样本有问题？srap引物不是通用引物麽，应该5对都可以p出来一点点吧，就是什么都没有，为什么呢？
     另外，请问各位大虾高手，俺看到有文献是用ISSR来做俺的那个植物的，请问，俺用srap引物的话，pcr体系跟其一样有木有问题呢？因为引物不一样，退火温度也就不一样了。
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1楼 2013-08-15 09:10:28
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