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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 真菌DNA提取老是被降解掉了，请支招儿
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christll

新虫 (初入文坛)

[交流] 真菌DNA提取老是被降解掉了，请支招儿

本人最近在做真菌的DNA 提取，遇到问题具体如下： 前期步骤应该都没多大问题，在用预冷的无水乙醇沉淀时，混匀几下，出现预想的白色絮状物，经经验判断为DNA絮状物，挑出来用75%的乙醇漂洗之后，真空30°烘干。溶解100ul的dH2O中，跑胶验证。  问题是：絮状物的量是比较大量的，但是跑胶来看DNA的条带亮度非常弱，加过RNase处理之后再跑胶，什么都没有了。 请问各位有没有遇到类似的情况，问题出现在哪里呢，我做了3次都是这样子。谢谢各位了！
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1楼 2013-08-14 21:52:59
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)
★
christll(金币+1): 谢谢参与
不太可能吧，DNA都讲解这么厉害？
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4楼2013-08-14 23:41:22
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wswsjz

木虫 (职业作家)
★
christll(金币+1): 谢谢参与
祝福，努力发论文！
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2楼2013-08-14 22:42:21
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longrna

新虫 (正式写手)
★
christll(金币+1): 谢谢参与
絮状沉淀可能是DNA，也有可能是多糖类的杂质。
有些真菌的DNA不好提，多糖含量多，尝试换其他的裂解液或方法。
你用水溶解再用RNase消化，本来提取的DNA可能量就非常弱，而如果你的RNase含有DNase 污染的情况下，也是很容易将你本就非常弱的DNA一同消化掉。
建议使用TE溶解DNA（体积先不要用100ul那么多），RNase消化前可90度先处理RNase灭活其中的DNase。
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6楼2013-08-15 08:40:20
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花雨sky

金虫 (小有名气)
★
christll(金币+1): 谢谢参与
前一段时间一直跟着师姐做微生物DNA提取，提出来后的DNA量比较少，你用的什么方法？可以加些TE清洗下，去除杂质，最后DNA置于超级工作台吹干或者晾干试试
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7楼2013-08-15 20:52:41
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