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christll

新虫 (初入文坛)

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虫号: 1676928

[交流] 真菌DNA提取老是被降解掉了，请支招儿

本人最近在做真菌的DNA 提取，遇到问题具体如下：前期步骤应该都没多大问题，在用预冷的无水乙醇沉淀时，混匀几下，出现预想的白色絮状物，经经验判断为DNA絮状物，挑出来用75%的乙醇漂洗之后，真空30°烘干。溶解100ul的dH2O中，跑胶验证。问题是：絮状物的量是比较大量的，但是跑胶来看DNA的条带亮度非常弱，加过RNase处理之后再跑胶，什么都没有了。请问各位有没有遇到类似的情况，问题出现在哪里呢，我做了3次都是这样子。谢谢各位了！

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1楼2013-08-14 21:52:59

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longrna

新虫 (正式写手)

MolEPI: 7
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虫号: 1473815

★
christll(金币+1): 谢谢参与

絮状沉淀可能是DNA，也有可能是多糖类的杂质。
有些真菌的DNA不好提，多糖含量多，尝试换其他的裂解液或方法。
你用水溶解再用RNase消化，本来提取的DNA可能量就非常弱，而如果你的RNase含有DNase 污染的情况下，也是很容易将你本就非常弱的DNA一同消化掉。
建议使用TE溶解DNA（体积先不要用100ul那么多），RNase消化前可90度先处理RNase灭活其中的DNase。