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christll

新虫 (初入文坛)


[交流] 真菌DNA提取老是被降解掉了,请支招儿

本人最近在做真菌的DNA 提取,遇到问题具体如下: 前期步骤应该都没多大问题,在用预冷的无水乙醇沉淀时,混匀几下,出现预想的白色絮状物,经经验判断为DNA絮状物,挑出来用75%的乙醇漂洗之后,真空30°烘干。溶解100ul的dH2O中,跑胶验证。  问题是:絮状物的量是比较大量的,但是跑胶来看DNA的条带亮度非常弱,加过RNase处理之后再跑胶,什么都没有了。 请问各位有没有遇到类似的情况,问题出现在哪里呢,我做了3次都是这样子。谢谢各位了!
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wswsjz

木虫 (职业作家)



christll(金币+1): 谢谢参与
祝福,努力发论文!
2楼2013-08-14 22:42:21
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Fleaves

至尊木虫 (著名写手)



christll(金币+1): 谢谢参与
不太可能吧,DNA都讲解这么厉害?
4楼2013-08-14 23:41:22
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pypsak

金虫 (正式写手)



christll(金币+1): 谢谢参与
DNA晾干试试
5楼2013-08-15 08:37:50
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longrna

新虫 (正式写手)



christll(金币+1): 谢谢参与
絮状沉淀可能是DNA,也有可能是多糖类的杂质。
有些真菌的DNA不好提,多糖含量多,尝试换其他的裂解液或方法。
你用水溶解再用RNase消化,本来提取的DNA可能量就非常弱,而如果你的RNase含有DNase 污染的情况下,也是很容易将你本就非常弱的DNA一同消化掉。
建议使用TE溶解DNA(体积先不要用100ul那么多),RNase消化前可90度先处理RNase灭活其中的DNase。
6楼2013-08-15 08:40:20
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花雨sky

金虫 (小有名气)



christll(金币+1): 谢谢参与
前一段时间一直跟着师姐做微生物DNA提取,提出来后的DNA量比较少,你用的什么方法?可以加些TE清洗下,去除杂质,最后DNA置于超级工作台吹干或者晾干试试
7楼2013-08-15 20:52:41
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简单回复
2013-08-14 23:21   回复  
christll(金币+1): 谢谢参与
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