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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » BL21菌株进行甘油保存时，需要加入卡那霉素吗？如需，加入的浓度是多少？
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萌萌李萌萌

金虫 (小有名气)

[求助] BL21菌株进行甘油保存时，需要加入卡那霉素吗？如需，加入的浓度是多少？

各位战友，求助，问题如标题所示，BL21菌株内含PET30a质粒，需要进行保存，用甘油保存的话，需要加入多少抗生素呢？烦请大家帮助一下！
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1楼 2013-08-05 17:03:30
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

秋水素心

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
萌萌李萌萌: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-05 19:46:57
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-08-06 08:37:32
不需要再额外加抗生素的，我没加过，直接按比例将菌液加入灭菌好的甘油就好
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认真过好每一天！
2楼2013-08-05 19:35:44
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普通回帖

萌萌李萌萌

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 秋水素心 at 2013-08-05 19:35:44
不需要再额外加抗生素的，我没加过，直接按比例将菌液加入灭菌好的甘油就好

不加抗生素的话，不用担心质粒丢失吗？我看着小木虫里众说纷纭，请问你有没有具体的保存步骤或者参考文献？谢谢
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3楼2013-08-05 19:46:45
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秋水素心

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 萌萌李萌萌 at 2013-08-05 19:46:45
不加抗生素的话，不用担心质粒丢失吗？我看着小木虫里众说纷纭，请问你有没有具体的保存步骤或者参考文献？谢谢...

加入甘油后，直接-80度冻存
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认真过好每一天！
4楼2013-08-05 19:48:54
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萌萌李萌萌

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 秋水素心 at 2013-08-05 19:48:54
加入甘油后，直接-80度冻存...

-80℃条件下，15%的甘油浓度，-20℃条件下，50%的甘油浓度？菌液里面含有50ug/ml的卡那霉素，所以不用另外加抗生素了？
正常的菌株保存，不是将菌液先在平板上划线，然后单菌落再划到斜面上，然后再用棉棒刮取斜面上的菌体放入不同浓度甘油保存液中吗？
这种重组的细菌，直接液体增殖后，用增殖液保存就可以了？？
好不意思，我是初学者，问题较多！
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5楼2013-08-05 19:59:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-08-06 08:37:49
萌萌李萌萌: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-06 09:04:30
摇菌时要加抗生素。摇好的菌液与甘油按照比例混合时不用补抗生素了。在-80°C菌是不扩增的，不存在质粒丢失问题。
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6楼2013-08-06 00:21:26
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bujunyang

木虫 (正式写手)

卓尔不群

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-08-06 08:38:02
萌萌李萌萌: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-08-06 09:04:40
一般15-20%的甘油，-80冻存，甘油浓度高了容易引起突变，低了会造成细胞膜的损伤，引起死亡。菌株最好半年活化一次(我们实验室一放几年不活化，也没问题，如果是重要的菌株还是定期活化的好)。至于抗生素，摇菌时是加的，然后直接把甘油加到菌液中就可以了，不需要补加。
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来是偶然，去是必然。
7楼2013-08-06 05:10:37
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萌萌李萌萌

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by bujunyang at 2013-08-06 05:10:37
一般15-20%的甘油，-80冻存，甘油浓度高了容易引起突变，低了会造成细胞膜的损伤，引起死亡。菌株最好半年活化一次(我们实验室一放几年不活化，也没问题，如果是重要的菌株还是定期活化的好)。至于抗生素，摇菌时是 ...

你好，请问，如果保存在-20℃，需要多大浓度的甘油呢？有人告诉我是50%，然后-20℃条件下的，可以经常拿出来用，但是-80℃条件下的，尽量不要使用了。这样子对吗？
谢谢
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8楼2013-08-06 09:07:21
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bujunyang

木虫 (正式写手)

卓尔不群

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
萌萌李萌萌: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-08-11 11:26:46
引用回帖:
8楼: Originally posted by 萌萌李萌萌 at 2013-08-06 02:07:21
你好，请问，如果保存在-20℃，需要多大浓度的甘油呢？有人告诉我是50%，然后-20℃条件下的，可以经常拿出来用，但是-80℃条件下的，尽量不要使用了。这样子对吗？
谢谢...

-20℃条件下也是一样的浓度，你想想温度低了，冻伤小了，怎么反而增加甘油浓度呢，只不过-20℃保存的时间要短些
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来是偶然，去是必然。
9楼2013-08-08 04:56:41
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zhupanlinjie

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
萌萌李萌萌: 金币+2 2013-08-11 11:27:06
一般不用添加抗生素！
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10楼2013-08-11 09:57:56
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