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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)

[求助] 这句文献是什么意思?

本人从没做过蛋白提取,看了篇文献毫无想法,遇到这么几句,是什么意思?谢谢各位前辈。

1.the precipitate was dissolved in 20mM Tris-HCl buffer(PH7.4) and dialysed against the same buffer.

2.after 16h of dialysis, the sample was applied onto a ConA sepharose 4B column pre-equilibrated with equilibration buffer(20mM Tris-HCl, 1M NaCl,1mM CaCl2, MgCl2, MnCl2) at a flow rate of 0.1 ml/min.

问题:
1.第一句的里的20mM Tris-HCl buffer(PH7.4) 怎么配?
2.against the same buffer 什么意思?透析的话外面不是用水吗?
3.20mM Tris-HCl, 1M NaCl,1mM CaCl2, MgCl2, MnCl2什么意思,是说含有浓度1M的 NaCl和1mM的 CaCl2, 1mM的MgCl2, 1mM的MnCl2的20mM Tris-HCl溶液来冲吗?就这一种溶液还是说用上面几种溶液依次冲?

跪谢!
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
清清柳岸枫(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-05 13:30:02
1、Tris-HCl的配方网上下一个就好了,或者直接配20mM Tris-然后用HCl调pH7.4,定容。
2、用含有浓度1M的 NaCl和1mM的 CaCl2, 1mM的MgCl2, 1mM的MnCl2的20mM Tris-HCl溶液来洗。

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2楼2013-08-05 10:17:29
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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-05 10:17:29
1、Tris-HCl的配方网上下一个就好了,或者直接配20mM Tris-然后用HCl调pH7.4,定容。
2、用含有浓度1M的 NaCl和1mM的 CaCl2, 1mM的MgCl2, 1mM的MnCl2的20mM Tris-HCl溶液来洗。

嗯,谢谢。还有一句哈,against the same buffer什么意思呢?
还有一句: proteins in the supernatant were fractionated by ammonium sulphate precipitation(20%-60%)什么意思?这里的20%-60%啥意思.?
3楼2013-08-05 11:30:42
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
清清柳岸枫: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 跪谢! 2013-08-05 15:31:53
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-05 21:38:09
dialysed against the same buffer就是用同样的缓冲液透析。
proteins in the supernatant were fractionated by ammonium sulphate precipitation(20%-60%)的意思是上清用20-60%饱和度硫酸铵分级沉淀,即用两次沉淀,先用20%的沉淀下,收集上清,然后再加硫酸铵至60%饱和度再次沉淀,收集沉淀。
4楼2013-08-05 14:31:29
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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-05 14:31:29
dialysed against the same buffer就是用同样的缓冲液透析。
proteins in the supernatant were fractionated by ammonium sulphate precipitation(20%-60%)的意思是上清用20-60%饱和度硫酸铵分级沉淀,即用两次沉 ...

从没提取过蛋白哈,还是有些不明白。分级沉淀这步是不是这样哈:
上清液加入20%的硫酸铵溶液,得到沉淀,上清液和沉淀分离后,再向上清液中加入固体硫酸铵(是直接加固体吗,还是加硫酸铵浓溶液?加的时候一下子加进去呢还是边加边搅拌?转速有限制吗?),使硫酸铵达到60%,再得到一批沉淀,然后两次的沉淀和在一起就是总的所得的蛋白,是这样吗亲?

谢谢!
5楼2013-08-05 15:39:38
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 清清柳岸枫 at 2013-08-05 15:39:38
从没提取过蛋白哈,还是有些不明白。分级沉淀这步是不是这样哈:
上清液加入20%的硫酸铵溶液,得到沉淀,上清液和沉淀分离后,再向上清液中加入固体硫酸铵(是直接加固体吗,还是加硫酸铵浓溶液?加的时候一下子加 ...

方法是你说的这样的,但有些区别:一是一般直接加研磨处理的硫酸铵粉末;二是分级沉淀的意思是先低浓度硫酸铵除去一些杂蛋白,然后高浓度的沉淀目的蛋白,所以最后只要第二次(60%)得到的沉淀,而不是你说的两次的沉淀和在一起。
6楼2013-08-05 15:48:02
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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-05 15:48:02
方法是你说的这样的,但有些区别:一是一般直接加研磨处理的硫酸铵粉末;二是分级沉淀的意思是先低浓度硫酸铵除去一些杂蛋白,然后高浓度的沉淀目的蛋白,所以最后只要第二次(60%)得到的沉淀,而不是你说的两次的 ...

真心跪谢啊。还有一点哈,这个20%什么意思,是不是说我100ml的溶液就得加入20g的硫酸铵呢?后面再加到60g,是这样吗亲?
7楼2013-08-05 16:12:08
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 清清柳岸枫 at 2013-08-05 16:12:08
真心跪谢啊。还有一点哈,这个20%什么意思,是不是说我100ml的溶液就得加入20g的硫酸铵呢?后面再加到60g,是这样吗亲?...

不是,是饱和度,工具书和网上都能找到相应的表格的http://wenku.baidu.com/view/8b8e9b4af7ec4afe04a1df55.html
基础知识不牢固呀!
8楼2013-08-05 16:15:45
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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-05 16:15:45
不是,是饱和度,工具书和网上都能找到相应的表格的http://wenku.baidu.com/view/8b8e9b4af7ec4afe04a1df55.html
基础知识不牢固呀!...

偶真心从没搞过蛋白……偶是学药剂的啊……哥哥教训的极是,我得多看看资料。谢了
9楼2013-08-05 16:21:04
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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-05 10:17:29
1、Tris-HCl的配方网上下一个就好了,或者直接配20mM Tris-然后用HCl调pH7.4,定容。
2、用含有浓度1M的 NaCl和1mM的 CaCl2, 1mM的MgCl2, 1mM的MnCl2的20mM Tris-HCl溶液来洗。

亲叨扰了哈,再问个问题,这个Tris-HCl是不是这样配哈:
配1000ml,称Tris  121.14g,加适量水溶解,然后用0.1M的HCl调节PH至7.4,然后定容至1000ml。是这样吗?加水溶解的时候加多少呢?500?800?调节好PH再定容会不会使PH发生变化?跪谢!
10楼2013-08-06 10:23:07
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