24小时热门版块排行榜    

查看: 2228  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)

[求助] 这句文献是什么意思?

本人从没做过蛋白提取,看了篇文献毫无想法,遇到这么几句,是什么意思?谢谢各位前辈。

1.the precipitate was dissolved in 20mM Tris-HCl buffer(PH7.4) and dialysed against the same buffer.

2.after 16h of dialysis, the sample was applied onto a ConA sepharose 4B column pre-equilibrated with equilibration buffer(20mM Tris-HCl, 1M NaCl,1mM CaCl2, MgCl2, MnCl2) at a flow rate of 0.1 ml/min.

问题:
1.第一句的里的20mM Tris-HCl buffer(PH7.4) 怎么配?
2.against the same buffer 什么意思?透析的话外面不是用水吗?
3.20mM Tris-HCl, 1M NaCl,1mM CaCl2, MgCl2, MnCl2什么意思,是说含有浓度1M的 NaCl和1mM的 CaCl2, 1mM的MgCl2, 1mM的MnCl2的20mM Tris-HCl溶液来冲吗?就这一种溶液还是说用上面几种溶液依次冲?

跪谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-05 14:31:29
dialysed against the same buffer就是用同样的缓冲液透析。
proteins in the supernatant were fractionated by ammonium sulphate precipitation(20%-60%)的意思是上清用20-60%饱和度硫酸铵分级沉淀,即用两次沉 ...

从没提取过蛋白哈,还是有些不明白。分级沉淀这步是不是这样哈:
上清液加入20%的硫酸铵溶液,得到沉淀,上清液和沉淀分离后,再向上清液中加入固体硫酸铵(是直接加固体吗,还是加硫酸铵浓溶液?加的时候一下子加进去呢还是边加边搅拌?转速有限制吗?),使硫酸铵达到60%,再得到一批沉淀,然后两次的沉淀和在一起就是总的所得的蛋白,是这样吗亲?

谢谢!
5楼2013-08-05 15:39:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
清清柳岸枫(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-05 13:30:02
1、Tris-HCl的配方网上下一个就好了,或者直接配20mM Tris-然后用HCl调pH7.4,定容。
2、用含有浓度1M的 NaCl和1mM的 CaCl2, 1mM的MgCl2, 1mM的MnCl2的20mM Tris-HCl溶液来洗。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2013-08-05 10:17:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-05 10:17:29
1、Tris-HCl的配方网上下一个就好了,或者直接配20mM Tris-然后用HCl调pH7.4,定容。
2、用含有浓度1M的 NaCl和1mM的 CaCl2, 1mM的MgCl2, 1mM的MnCl2的20mM Tris-HCl溶液来洗。

嗯,谢谢。还有一句哈,against the same buffer什么意思呢?
还有一句: proteins in the supernatant were fractionated by ammonium sulphate precipitation(20%-60%)什么意思?这里的20%-60%啥意思.?
3楼2013-08-05 11:30:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
清清柳岸枫: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 跪谢! 2013-08-05 15:31:53
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-05 21:38:09
dialysed against the same buffer就是用同样的缓冲液透析。
proteins in the supernatant were fractionated by ammonium sulphate precipitation(20%-60%)的意思是上清用20-60%饱和度硫酸铵分级沉淀,即用两次沉淀,先用20%的沉淀下,收集上清,然后再加硫酸铵至60%饱和度再次沉淀,收集沉淀。
4楼2013-08-05 14:31:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题,而不是去凝练问题 +7 瞬息宇宙 2026-09-01 14/700 2026-09-02 17:33 by ma0526
[基金申请] 要骂人了,新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西,结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 10/500 2026-09-02 11:35 by 大不刘6
[基金申请] 学科评审组评审是指会评吗? +5 瞬息宇宙 2026-08-31 5/250 2026-09-02 10:13 by 雨冰共舞
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +13 Kittylucky 2026-08-27 14/700 2026-09-01 11:06 by feng6531
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +7 gdd2018 2026-08-28 12/600 2026-09-01 08:32 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 国社科又开始会评了,不知道这次命运如何 +7 雨打竹帘 2026-08-30 11/550 2026-08-31 23:16 by hittle2008
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗? +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
信息提示
请填处理意见