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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)

[求助] 这句文献是什么意思？

本人从没做过蛋白提取，看了篇文献毫无想法，遇到这么几句，是什么意思？谢谢各位前辈。

1.the precipitate was dissolved in 20mM Tris-HCl buffer(PH7.4) and dialysed against the same buffer.

2.after 16h of dialysis, the sample was applied onto a ConA sepharose 4B column pre-equilibrated with equilibration buffer(20mM Tris-HCl, 1M NaCl,1mM CaCl2, MgCl2, MnCl2) at a flow rate of 0.1 ml/min.

问题：
1.第一句的里的20mM Tris-HCl buffer(PH7.4) 怎么配？
2.against the same buffer 什么意思？透析的话外面不是用水吗？
3.20mM Tris-HCl, 1M NaCl,1mM CaCl2, MgCl2, MnCl2什么意思，是说含有浓度1M的 NaCl和1mM的 CaCl2, 1mM的MgCl2, 1mM的MnCl2的20mM Tris-HCl溶液来冲吗？就这一种溶液还是说用上面几种溶液依次冲？

跪谢！
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1楼 2013-08-05 10:02:13
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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-05 10:17:29
1、Tris-HCl的配方网上下一个就好了，或者直接配20mM Tris-然后用HCl调pH7.4，定容。
2、用含有浓度1M的 NaCl和1mM的 CaCl2, 1mM的MgCl2, 1mM的MnCl2的20mM Tris-HCl溶液来洗。

嗯，谢谢。还有一句哈，against the same buffer什么意思呢？
还有一句： proteins in the supernatant were fractionated by ammonium sulphate precipitation(20%-60%)什么意思？这里的20%-60%啥意思.?
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3楼2013-08-05 11:30:42
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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-05 14:31:29
dialysed against the same buffer就是用同样的缓冲液透析。
proteins in the supernatant were fractionated by ammonium sulphate precipitation(20%-60%)的意思是上清用20-60%饱和度硫酸铵分级沉淀，即用两次沉 ...

从没提取过蛋白哈，还是有些不明白。分级沉淀这步是不是这样哈：
上清液加入20%的硫酸铵溶液，得到沉淀，上清液和沉淀分离后，再向上清液中加入固体硫酸铵（是直接加固体吗，还是加硫酸铵浓溶液？加的时候一下子加进去呢还是边加边搅拌？转速有限制吗？），使硫酸铵达到60%，再得到一批沉淀，然后两次的沉淀和在一起就是总的所得的蛋白，是这样吗亲？

谢谢！
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5楼2013-08-05 15:39:38
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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-05 15:48:02
方法是你说的这样的，但有些区别：一是一般直接加研磨处理的硫酸铵粉末；二是分级沉淀的意思是先低浓度硫酸铵除去一些杂蛋白，然后高浓度的沉淀目的蛋白，所以最后只要第二次（60%）得到的沉淀，而不是你说的两次的 ...

真心跪谢啊。还有一点哈，这个20%什么意思，是不是说我100ml的溶液就得加入20g的硫酸铵呢？后面再加到60g，是这样吗亲？
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7楼2013-08-05 16:12:08
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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-05 16:15:45
不是，是饱和度，工具书和网上都能找到相应的表格的http://wenku.baidu.com/view/8b8e9b4af7ec4afe04a1df55.html
基础知识不牢固呀！...

偶真心从没搞过蛋白……偶是学药剂的啊……哥哥教训的极是，我得多看看资料。谢了
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9楼2013-08-05 16:21:04
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清清柳岸枫

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by lxj341401 at 2013-08-05 10:17:29
1、Tris-HCl的配方网上下一个就好了，或者直接配20mM Tris-然后用HCl调pH7.4，定容。
2、用含有浓度1M的 NaCl和1mM的 CaCl2, 1mM的MgCl2, 1mM的MnCl2的20mM Tris-HCl溶液来洗。

亲叨扰了哈，再问个问题，这个Tris-HCl是不是这样配哈：
配1000ml,称Tris  121.14g,加适量水溶解，然后用0.1M的HCl调节PH至7.4，然后定容至1000ml。是这样吗？加水溶解的时候加多少呢？500？800？调节好PH再定容会不会使PH发生变化？跪谢！
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10楼2013-08-06 10:23:07
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