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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » DNA电泳 Mark拖尾 分不开 实验室灵异事件
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)

[交流] DNA电泳 Mark拖尾 分不开 实验室灵异事件

DNA电泳，Mark拖尾，并且跑不开，各种原因排除，还是没解决
（1）怀疑琼脂糖有问题，由原来的西班牙牌子，换了sigma的，还是一样结果。
（2）有4个电泳仪电源，三个电泳槽，不同搭配，结果还是一样
（3）怀疑染色液gelred,又买了新的，一样结果
（4）电泳液有问题，配了几次，精密调pH值，结果还是一样
（5）怀疑实验室电压有问题，用万能表一测没问题，并且换到其他房间跑电压，还是一样结果。
（6）电压从正常，到高电压不停调试，一样结果
（7）拿自己配好的胶及缓冲液，到其他实验室跑，第一次还行，到后面几次也跑的不好。
（8）Mark也没问题，都是新买的。

附件都是类似的电泳结果，所有的条件都换过了，除了配TAE的Tris,冰乙酸，EDTA之外。至今没解决，大家开玩笑说：实验室灵异事件。

希望大家能提出好意见，帮忙解决这个问题。
DNA电泳 Mark拖尾 分不开 实验室灵异事件
001.jpg


DNA电泳 Mark拖尾 分不开 实验室灵异事件-1
002.jpg


DNA电泳 Mark拖尾 分不开 实验室灵异事件-2
003.jpg


DNA电泳 Mark拖尾 分不开 实验室灵异事件-3
004.jpg
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1楼 2013-08-03 20:37:24
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

672234993

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我最近也是遇到同样的问题，头疼。。。
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8楼2013-08-04 09:40:36
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yeelng

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我遇见过一摸一样的问题，用gelred染料或造成拖尾，gelred分子量大，和DNA结合不充分，影响DNA在电泳中的迁移效率。不知道你的染料是加在胶里还是泡好后泡染的，看样子应该是加胶里跑的电泳，建议换SBYR green染料
1,2分别是gelred和SYBR green的染料（加胶里面），还有方法是泡染或者是把gelred加在loading里和样品混一起，前者费时费力，后者定量不准确
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22楼2013-08-05 15:34:24
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小乖_1990

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是不是你的胶没完全凝啊，都是中间不行。。。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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31楼2013-08-06 13:26:31
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Tporker

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小分子的条带比较规整，大分子的有扫帚尾巴，应该是制胶不够均匀，我们都是沸腾以后，拿出来摇匀，重复三次。另外也可能是你的拔梳子的时候过快，导致上样孔不规整，慢点拔用力两边均匀，电泳前检查上样孔是不是有碎胶。有的话可以先空跑十分钟，然后再上样。
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32楼2013-08-06 13:59:20
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，我原来在别的地用syb green,从来没有marker拖尾现象，到了这边用gelred，marker一直拖尾，换了胶，换了缓冲液，甚至换了配缓冲液的水，还是不行。我觉得楼上一位虫友说的对，可能是染料的问题
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33楼2013-08-06 17:09:08
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Sthunder

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-03 22:12:47
看你最后一张中间那条带还可以，呵呵! 建议将溶胶的时候，多打1 min，让其彻底溶解！同时你看跑胶条件，也检测一下mark是否有问题，你们实验室其他人用同样mark是否有同样结果。Good luck！
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3楼2013-08-03 21:41:53
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gaoyang636

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
去别的实验室借个好用的marker，
回来跑的时候，只点2ul，不要多点，跑跑看
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4楼2013-08-03 22:49:53
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whui

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
Millipore水彻底清洗电泳槽和梳子；新制电泳液和胶；降低电压(60V或以下，具体根据仪器定）
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5楼2013-08-04 01:07:45
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天地沙鸥123

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
总感觉你的电压不稳定
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6楼2013-08-04 08:59:16
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
根据我跑胶的经验哈，我觉得你电压可能大了，你试着调小点试试？
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7楼2013-08-04 09:29:05
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 堍仔 at 2013-08-04 09:29:05
根据我跑胶的经验哈，我觉得你电压可能大了，你试着调小点试试？

你是设多少V/cm? 电泳仪电源是按5V/cm设的，两铂丝之间16cm,设电压80V,但用万能表测了下电泳槽内，两铂丝处液面的电压也就60多伏，与预设定的电压少十几左右，电压应该不大啊！
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9楼2013-08-04 10:01:53
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by whui at 2013-08-04 01:07:45
Millipore水彻底清洗电泳槽和梳子；新制电泳液和胶；降低电压(60V或以下，具体根据仪器定）

你是用什么水配的？是去离子水吗？
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10楼2013-08-04 10:03:03
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-08-03 22:49:53
去别的实验室借个好用的marker，
回来跑的时候，只点2ul，不要多点，跑跑看

Mark都是新的，而且是各种不同分子量的Mark都这样
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11楼2013-08-04 10:04:12
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Sthunder at 2013-08-03 21:41:53
看你最后一张中间那条带还可以，呵呵! 建议将溶胶的时候，多打1 min，让其彻底溶解！同时你看跑胶条件，也检测一下mark是否有问题，你们实验室其他人用同样mark是否有同样结果。Good luck！

样品的话，质粒一般都是一条带，很均匀，但PCR产物和Mark拖尾严重，Mark一般前3条带还行，后面的就不行。
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12楼2013-08-04 10:08:22
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懒洋洋羊吃草

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
让别人操作一下，看看是不是操作的原因
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13楼2013-08-04 11:02:31
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
9楼: Originally posted by xiaoxia110 at 2013-08-04 10:01:53
你是设多少V/cm? 电泳仪电源是按5V/cm设的，两铂丝之间16cm,设电压80V,但用万能表测了下电泳槽内，两铂丝处液面的电压也就60多伏，与预设定的电压少十几左右，电压应该不大啊！...

我们实验室都是跑200V的，你试试电泳的时候跑大点，时间短点呢？
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14楼2013-08-04 12:58:37
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857136129

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
感觉可能是你的缓冲液pH的问题，因为随着缓冲液跑胶次数的增多，其pH会发生变话，进而影响电泳的结果，你可以试下换下新的缓冲液。
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15楼2013-08-04 13:22:49
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whui

至尊木虫 (著名写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by xiaoxia110 at 2013-08-04 10:03:03
你是用什么水配的？是去离子水吗？...

Millipore水
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16楼2013-08-05 00:08:13
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 懒洋洋羊吃草 at 2013-08-04 11:02:31
让别人操作一下，看看是不是操作的原因

整个实验室，大家都跑成这样。
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17楼2013-08-05 08:43:51
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 堍仔 at 2013-08-04 12:58:37
我们实验室都是跑200V的，你试试电泳的时候跑大点，时间短点呢？...

那你的电泳槽多长的？是大型的？这么高，胶会很烫啊
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18楼2013-08-05 08:45:42
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莓林塔

木虫 (小有名气)
果然很灵异。。。
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19楼2013-08-05 09:21:14
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堍仔

至尊木虫 (文坛精英)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
18楼: Originally posted by xiaoxia110 at 2013-08-05 08:45:42
那你的电泳槽多长的？是大型的？这么高，胶会很烫啊...

这个我还真没量过，不过我们实验室跑胶的比别人的是大点
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20楼2013-08-05 09:41:17
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我记得拖尾是盐离子浓度的问题，记不清了，你查下，有相关拖尾的解决方案
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21楼2013-08-05 09:57:47
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piaofu

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是不是marker放置时间过长？
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23楼2013-08-05 15:50:12
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mmz123250

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
简单：
marker问题、琼脂糖凝胶、电泳液问题。
1、用自己的Marker，用别人的琼脂糖胶、电泳仪、电泳条件、点样方法，跑跑看？
2、自己的琼脂糖，别人的溶胶条件，别人的marker、琼脂糖胶、电泳仪、电泳条件、点样方法，跑一个？
3、用别人的电泳液试一个
1、2、3都不行的话，就只有采用第4种方式了，什么都用别人的，自己去跑一个，确定不是人品问题。
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24楼2013-08-05 16:21:41
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loudbing

禁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
25楼2013-08-05 16:24:15
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loudbing

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
26楼2013-08-05 16:25:02
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biosafety

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
一看就是缓冲液的问题，主要是PH值不对。
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27楼2013-08-05 19:47:04
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)
引用回帖:
27楼: Originally posted by biosafety at 2013-08-05 19:47:04
一看就是缓冲液的问题，主要是PH值不对。

PH也测过了，你的ph调到多少？
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28楼2013-08-05 19:54:34
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beautybanana

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个问题似乎电泳的电压过大了，不知道你用的电压是多少，我觉得100V左右就可以了，稍小的都可以，这样跑的条带一般不会出现弯弯的模样，对于电泳液，原始的TAE或TBE，10倍稀释，用一般的纯净水就可以了，调pH什么的都可以不用了，我做电泳，电泳液随便稀释随便倒到电泳槽里就可以了，Marker 要是有分不开的，可能是你用的浓度大了（取样太多，要么这Marker就是过期的货，不要以为新买的就是好货），你的第4张图片条带怎么还有红色的东西？琼脂糖加电泳液多煮沸几次，这样更均匀些。这简单的实验怎搞成这样？
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29楼2013-08-05 21:53:36
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wwb95599

铜虫 (小有名气)
★
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胶的浓度和缓冲夜的浓度是否是一样的?如果差别太大,是会跑成这样子的
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30楼2013-08-06 12:20:47
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)
引用回帖:
22楼: Originally posted by yeelng at 2013-08-05 15:34:24
我遇见过一摸一样的问题，用gelred染料或造成拖尾，gelred分子量大，和DNA结合不充分，影响DNA在电泳中的迁移效率。不知道你的染料是加在胶里还是泡好后泡染的，看样子应该是加胶里跑的电泳，建议换SBYR green染料
...

最后发现确实是gelred的问题，将gelred与样品混合后再跑电泳，Marker分开了，每根条带很清楚，没拖尾！
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34楼2013-08-13 08:42:36
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xiaoxia110

木虫 (正式写手)
引用回帖:
33楼: Originally posted by windycui at 2013-08-06 17:09:08
楼主，我原来在别的地用syb green,从来没有marker拖尾现象，到了这边用gelred，marker一直拖尾，换了胶，换了缓冲液，甚至换了配缓冲液的水，还是不行。我觉得楼上一位虫友说的对，可能是染料的问题

确实是gelred问题，先将gelred与marker混合，再跑电泳，就没有拖尾现象。
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35楼2013-08-13 08:44:19
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冷眼倦天涯

金虫 (小有名气)
Good luck！
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36楼2013-08-13 12:56:43
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windycui

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
35楼: Originally posted by xiaoxia110 at 2013-08-13 08:44:19
确实是gelred问题，先将gelred与marker混合，再跑电泳，就没有拖尾现象。...

请问楼主，是在点样时把gelred加进去吗？那大概加多少呢？能出来清晰的条带吗？从来没有试过这样加的，我们是把gelred加入胶里，35ml的1.2%的琼脂糖凝胶只加1微升的gelred啊
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37楼2013-08-13 15:03:51
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sinky熹

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
虽然是老帖，但我们实验室最近也出现这个情况，，之前用的GEl red没这个问题，换了另一家公司卖的gelred一直跑出来拖尾，marker也拖尾，我们是制胶的时候加进去的，100ml加10uL，请问怎样加在产物里？比例？加完要不要放置一会？
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38楼2014-07-02 13:30:46
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xianzhi20102楼
2013-08-03 21:02   回复  
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