[求助] 蓝藻DNA提取

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1楼2013-08-02 08:35:14

如果可以123

金虫 (正式写手)

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如果是第一次建议用试剂盒，提出纯度比较高

[ 发自小木虫客户端 ]

5楼2013-08-04 18:20:50

查看全部 6 个回答

Sthunder

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
litingwen: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 谢谢！ 2013-08-02 17:44:42

1 取藻20 ml，4 000 rps离心3 min，用枪移上清，最后留约1 ml，吹匀后移到1.5 mlEP管内，4 000 rps离心5 min。
2 向沉淀中加入567 μL的TE缓冲掖，用枪吹打使其充分悬浮，加3 μL的蛋白酶K（20mg/ml，该酶在95℃，10 min才失活），30 μL 10％的SDS，37 ℃温育1 h(每15 min混匀一次)
3 加100 μL的5 M的NaCl，用枪混匀，再加80 μL CTAB/NaCl（该试剂在使用前65℃温育使融化，再在室温冷却到30℃使用），混匀，65℃温育10 min。
4 加等体积（约750μL）氯仿/异戊纯（24/1），混匀（轻摇约5 min），12 000rps离心7 min，转上清到新管中。
5 加等体积的酚/氯仿/异戊醇（25/24/1），12 000 rpm离心7 min，转上清到新管中。
6 加入0.6体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，静置5 min，12 000 rpm离心5 min，弃上清，用70％乙醇洗涤沉淀两次（12 000 rpm离心1 min）。
7弃上清，放置使乙醇干燥。重溶于30～50μL TE（加RNA酶）中，65℃温育15 min，然后放置-20℃冰箱保存。

注：
CTAB提取液： NaCl 1.4MCTAB（w/v） 2％Tris•Cl 100mMEDTA 20mM巯基乙醇 0.2％

互助互励，共奋共进！！

2楼2013-08-02 09:28:55

tianzhibin

至尊木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
litingwen: 金币+2, ★有帮助 2013-08-02 17:44:20

蓝藻DNA提取，用DNA提取试剂盒试试。

都在路上，都要努力。

3楼2013-08-02 14:37:23

wenzi6337

木虫 (著名写手)

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我们实验室的提取方法：
1、取3 ml藻，1200rpm离心30s，弃上清，加入400μl TE Buffer重悬；
2、加入少量石英砂，200μl 饱和酚，200μl氯仿/异戊醇（24/1 v/v），剧烈震荡1min；
3、 12000rpm 离心10min，取上清约400μ，加入1μRNaseA，37℃ 30min 消化RNA；
4、加入400μ氯仿/异戊醇（24/1 v/v）， 12 000 rpm离心10 min；
5、取上清300μ，加入60μ（1/5体积）5M NaCl和720μ（2倍体积）无水乙醇，-20℃沉降4hr；
6、 4℃ 12000rpm离心10min，弃上清，加入700μ 70%乙醇洗沉淀物；
7、 4℃ 7500rpm离心5min，弃上清，点离，彻底吸出乙醇；
8、室温干燥，加入20μ去离子水或TE Buffer溶解。

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litingwen

4楼2013-08-03 00:54:08