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litingwen实习版主
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[求助]
蓝藻DNA提取
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| 各位大侠，本人初接触蓝藻DNA提取，请问用什么方法提取比较好？ |
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Sthunder
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
litingwen: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 谢谢！ 2013-08-02 17:44:42
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1 取藻20 ml，4 000 rps离心3 min，用枪移上清，最后留约1 ml，吹匀后移到1.5 mlEP管内，4 000 rps离心5 min。 2 向沉淀中加入567 μL的TE缓冲掖，用枪吹打使其充分悬浮，加3 μL的蛋白酶K（20mg/ml，该酶在95℃，10 min才失活），30 μL 10％的SDS，37 ℃温育1 h(每15 min混匀一次) 3 加100 μL的5 M的NaCl，用枪混匀，再加80 μL CTAB/NaCl（该试剂在使用前65℃温育使融化，再在室温冷却到30℃使用），混匀，65℃温育10 min。 4 加等体积（约750μL）氯仿/异戊纯（24/1），混匀（轻摇约5 min），12 000rps离心7 min，转上清到新管中。 5 加等体积的酚/氯仿/异戊醇（25/24/1），12 000 rpm离心7 min，转上清到新管中。 6 加入0.6体积的异丙醇，轻轻混合直到DNA沉淀下来，静置5 min，12 000 rpm离心5 min，弃上清，用70％乙醇洗涤沉淀两次（12 000 rpm离心1 min）。 7弃上清，放置使乙醇干燥。重溶于30～50μL TE（加RNA酶）中，65℃温育15 min，然后放置-20℃冰箱保存。 注： CTAB提取液： NaCl 1.4MCTAB（w/v） 2％Tris•Cl 100mMEDTA 20mM巯基乙醇 0.2％ |
2楼2013-08-02 09:28:55
tianzhibin
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3楼2013-08-02 14:37:23
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我们实验室的提取方法： 1、 取3 ml藻，1200rpm离心30s，弃上清，加入400μl TE Buffer重悬； 2、 加入少量石英砂，200μl 饱和酚，200μl氯仿/异戊醇（24/1 v/v），剧烈震荡1min； 3、 12000rpm 离心10min，取上清约400μ，加入1μRNaseA，37℃ 30min 消化RNA； 4、 加入400μ氯仿/异戊醇（24/1 v/v）， 12 000 rpm离心10 min； 5、 取上清300μ，加入60μ（1/5体积）5M NaCl和720μ（2倍体积）无水乙醇，-20℃沉降4hr； 6、 4℃ 12000rpm离心10min，弃上清，加入700μ 70%乙醇洗沉淀物； 7、 4℃ 7500rpm离心5min，弃上清，点离，彻底吸出乙醇； 8、室温干燥，加入20μ去离子水或TE Buffer溶解。 |
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litingwen4楼2013-08-03 00:54:08
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