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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » （OD 光密度，A 吸光度）活性测定中的疑惑
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saintkun001

木虫 (著名写手)

[交流] （OD 光密度，A 吸光度）活性测定中的疑惑已有3人参与

在利用微量稀释法（96孔板法）：测定化合物对细菌的最小抑菌浓度（MIC）。
取适量菌体培养液用紫外可见分光光度仪测定在600nm下的吸光度，以不加细菌的培养液作为空白对照，根据每 0.1OD600相当于浓度为1×108cfu/mL。  一般用这个做基准。

我的问题是0.1 OD 600  到底该怎么理解，仪器上测定的到底是什么?
该这么理解："600nm 的波长下，对应的吸光度是0.1的情况下。。。。。"？？？

OD 应该是optical density的缩写，也就是指光密度，他和吸光度（absorbance）应该不是一个概念，和吸光度直接相关的是透光率（transmittance），   不过光密度好像和透光率能够联系到一起。。。

我对此很疑惑， 0.1 OD600  到底该怎么理解，紫外可见分光光度计上测定的到底是什么?

看了回复后，我觉得是不是我没有说清楚问题， [b]我的意思是  0.1 OD600  到底该怎么理解，紫外可见分光光度计上测定的到底是什么?这个0.1 是光密度？吸光度？是什么？问的有点业余，请高手指点。。。。

[ Last edited by saintkun001 on 2013-7-30 at 10:08 ]
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1楼2013-07-28 19:24:00
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mojay8023

铁虫 (初入文坛)
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zhang8826857: 金币+3, 鼓励新虫 2013-07-30 18:28:05
0.1的意思应该是稀释了十倍，600就是波长为600nm；0.1OD600的意思应该是溶液稀释10倍后在波长为600nm下的光密度，它应该是一个参考值，你所说的光密度相当于细菌浓度为1×108cfu/mL。我也是菜鸟，相互学习学习
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2楼2013-07-28 23:51:19
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mojay8023

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mojay8023 at 2013-07-28 23:51:19
0.1的意思应该是稀释了十倍，600就是波长为600nm；0.1OD600的意思应该是溶液稀释10倍后在波长为600nm下的光密度，它应该是一个参考值，你所说的光密度相当于细菌浓度为1×108cfu/mL。我也是菜鸟，相互学习学习

溶液应改为菌液
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3楼2013-07-28 23:52:31
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saintkun001

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mojay8023 at 2013-07-28 23:51:19
0.1的意思应该是稀释了十倍，600就是波长为600nm；0.1OD600的意思应该是溶液稀释10倍后在波长为600nm下的光密度，它应该是一个参考值，你所说的光密度相当于细菌浓度为1×108cfu/mL。我也是菜鸟，相互学习学习

“0.1的意思应该是稀释了十倍” 这个解释不太合适吧，他应该是对应的是什么测量值吧。

不太理解，我知道这个方法测定的是大概菌落浓度。 但是不太理解你的意思，按照你的意思，0.1OD600的是溶液稀释10倍后在波长为600nm下的光密度，它对应菌液浓度为1×108cfu/mL， 0.1是仪器测出来的？ 按照紫外可见分光光度仪测定的参数，他是透光率？吸光度？或者光密度？  他到底对应着什么？
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4楼2013-07-29 09:13:12
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mojay8023

铁虫 (初入文坛)
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4楼: Originally posted by saintkun001 at 2013-07-29 09:13:12
“0.1的意思应该是稀释了十倍” 这个解释不太合适吧，他应该是对应的是什么测量值吧。

不太理解，我知道这个方法测定的是大概菌落浓度。 但是不太理解你的意思，按照你的意思，0.1OD600的是溶液稀释10倍后在波长 ...

因为如果菌液太浓的话，所测出来的光密度数值会有比较大的误差，这时候就要对菌液做合适的稀释，稀释倍数视菌液浓度而定，可以是十倍，二十倍等，我们这边的话就尽量把光密度数值控制在0.2~0.8这个范围内，这样误差没那么大
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5楼2013-07-30 01:36:08
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saintkun001

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by mojay8023 at 2013-07-30 01:36:08
因为如果菌液太浓的话，所测出来的光密度数值会有比较大的误差，这时候就要对菌液做合适的稀释，稀释倍数视菌液浓度而定，可以是十倍，二十倍等，我们这边的话就尽量把光密度数值控制在0.2~0.8这个范围内，这样误差 ...

关于那个稀释问题是很容易理解的  ，我也清楚， 最后把测定值控制在0.2--0.8之间也是仪器分析中常用的参数设定。
我的意思是  0.1 OD600  到底该怎么理解，紫外可见分光光度计上测定的到底是什么?
0.1 是光密度？吸光度？ 还是你觉得是一样的 ？
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6楼2013-07-30 10:06:42
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_Xiao_Guan

新虫 (初入文坛)
★
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我觉得0.1是指的菌液稀释倍数，od600的数值是无法在紫外分光光度计上显示的，上面显示的是吸光度值（吸光度值和光密度值不是一个概念），分光光度计上的示数在0.1~0.65之间都可以，高了就要稀释，不知回答的是你要的答案么
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7楼2013-11-13 12:00:52
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yuyonglei

铜虫 (小有名气)
★
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我的理解是：如果你从酶标仪上面设置程序，OD600测出来就是在600nm下的吸光值，如果吸光值是0.3的话，那么对应的菌体浓度就是3×108cfu/mL.
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8楼2015-06-18 15:53:31
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