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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western遇到的问题
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duke188

新虫 (初入文坛)

[交流] western遇到的问题 已有22人参与

刚刚做转膜，目的蛋白160KD左右，电泳挺好的，湿转270mA，45分钟，可是marker不清楚，而且膜上和胶上marker都不见了，这是怎么了

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2013-07-26 17:07:51
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华农夏田

铁虫 (正式写手)
这是为何 ？
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要科研也要生活
2楼2013-07-26 17:17:21
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xz2001199802

金虫 (正式写手)
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myprayer: 金币+1, 鼓励积极交流发帖，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 11:13:03
markers都没了，说明就没转成，你确定，你没接反阴阳极
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越学越无知
3楼2013-07-26 18:05:29
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xz2001199802

金虫 (正式写手)
或者，你的膜和胶的顺序是正确的，初步感觉，蛋白跑另一个方向去了
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越学越无知
4楼2013-07-26 18:06:50
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duke188

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xz2001199802 at 2013-07-26 18:05:29
markers都没了，说明就没转成，你确定，你没接反阴阳极

没接反，70KD的marker很清楚，45min应该不会跑过吧

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2013-07-26 18:31:11
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xz2001199802

金虫 (正式写手)
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引用回帖:
5楼: Originally posted by duke188 at 2013-07-26 11:31:11
没接反，70KD的marker很清楚，45min应该不会跑过吧
...

那你就检测下膜上有没有你的蛋白就行了
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越学越无知
6楼2013-07-26 19:14:48
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嘴角依然上扬

金虫 (小有名气)
★
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会不会转膜时间有点短，或就是电极的事了。不清楚
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7楼2013-07-26 19:15:04
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
★
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那么大的蛋白我们都转3h吧

[ 发自小木虫客户端 ]
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8楼2013-07-26 19:51:41
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youcanfind

银虫 (正式写手)
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myprayer: 金币+1, 鼓励积极交流发帖，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 11:13:25
感觉目的蛋白没转过去，我过去用湿转，60多k的蛋白是80V转2h，不知道80V对应的电流是多少，建议楼主延长转印时间
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9楼2013-07-26 19:52:35
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zhangbighui

金虫 (正式写手)
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myprayer: 金币+1, 鼓励积极交流发帖，分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 11:13:38
这么大的蛋白不可能这么短的时间转上去的，如果没有接反电极建议２２０mA，２h.还有就是注意转膜时要加冰块降温，过高的温度会降低转膜效果。
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成功，就是成为你想成为的人
10楼2013-07-26 20:49:22
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