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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » western遇到的问题
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duke188

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
18楼: Originally posted by hexia313 at 2013-07-28 08:15:42
转膜时间太短了

有点可能

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21楼2013-07-28 18:49:21
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duke188

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by shishun2008 at 2013-07-27 14:27:15
应该是电极反了

绝对没反，还是有条带的

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22楼2013-07-28 18:49:55
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wilian8

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
转膜时间短了，我的目的蛋白170KD，250mA，要转2h以上。还有可能是转膜液的问题.
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23楼2013-07-29 12:27:44
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cy426312

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我50KD的蛋白，转了3.5H。。。应该是时间太短
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24楼2013-07-29 15:10:45
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ericyo918

至尊木虫 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
大蛋白和小蛋白的转膜速率是不一样的，有可能电流过大，转穿了，你可以减少小转膜时间或者电流。
下次可以在膜下面再加一个膜，看看有marker转到下面的膜上不
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25楼2013-07-29 15:40:26
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xiaoxiang5

银虫 (正式写手)
引用回帖:
20楼: Originally posted by duke188 at 2013-07-28 18:49:08
不是要全部浸泡么
...

难怪啊
你少加点水，把滤纸和膜基本润湿就可以了
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26楼2013-07-29 22:23:20
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厦大生物杨超

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果正负极没查错 也许是transfer buffer的问题 你可以问下其他人的实验结果 或者把sample给别人 让别人帮你跑一下就知道是不是你操作有问题了~
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Nosweetwithoutsweat！
27楼2013-07-29 23:11:10
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lugylucy

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
20楼: Originally posted by duke188 at 2013-07-28 18:49:08
不是要全部浸泡么
...

我在丁香园里问过，建议是transfer buffer尽量加满。
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28楼2013-08-02 20:49:37
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lugylucy

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
23楼: Originally posted by wilian8 at 2013-07-29 12:27:44
转膜时间短了，我的目的蛋白170KD，250mA，要转2h以上。还有可能是转膜液的问题.

你好，我的目的蛋白是180-190kDa，正在摸湿转的条件。如果300mA3h，你觉得怎么样？如果400mA 4h会不会存在转过的问题？谢谢！！！
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29楼2013-08-02 20:52:10
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929519755

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你的膜的孔径是多少？孔径过大的话，小分子量蛋白有可能穿过膜。建议你转膜时间短一点
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想你没话说
30楼2013-08-03 07:56:02
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