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duke188

新虫 (初入文坛)

[交流] western遇到的问题 已有22人参与

刚刚做转膜,目的蛋白160KD左右,电泳挺好的,湿转270mA,45分钟,可是marker不清楚,而且膜上和胶上marker都不见了,这是怎么了

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华农夏田

铁虫 (正式写手)

这是为何 ?
要科研也要生活
2楼2013-07-26 17:17:21
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

★ ★
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myprayer: 金币+1, 鼓励积极交流发帖,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 11:13:03
markers都没了,说明就没转成,你确定,你没接反阴阳极
越学越无知
3楼2013-07-26 18:05:29
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

或者,你的膜和胶的顺序是正确的,初步感觉,蛋白跑另一个方向去了
越学越无知
4楼2013-07-26 18:06:50
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duke188

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by xz2001199802 at 2013-07-26 18:05:29
markers都没了,说明就没转成,你确定,你没接反阴阳极

没接反,70KD的marker很清楚,45min应该不会跑过吧

[ 发自小木虫客户端 ]
5楼2013-07-26 18:31:11
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xz2001199802

金虫 (正式写手)


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引用回帖:
5楼: Originally posted by duke188 at 2013-07-26 11:31:11
没接反,70KD的marker很清楚,45min应该不会跑过吧
...

那你就检测下膜上有没有你的蛋白就行了
越学越无知
6楼2013-07-26 19:14:48
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嘴角依然上扬

金虫 (小有名气)


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会不会转膜时间有点短,或就是电极的事了。不清楚
7楼2013-07-26 19:15:04
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linyingjia

至尊木虫 (职业作家)


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那么大的蛋白我们都转3h吧

[ 发自小木虫客户端 ]
8楼2013-07-26 19:51:41
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youcanfind

银虫 (正式写手)

★ ★
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myprayer: 金币+1, 鼓励积极交流发帖,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 11:13:25
感觉目的蛋白没转过去,我过去用湿转,60多k的蛋白是80V转2h,不知道80V对应的电流是多少,建议楼主延长转印时间
9楼2013-07-26 19:52:35
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zhangbighui

金虫 (正式写手)

★ ★
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myprayer: 金币+1, 鼓励积极交流发帖,分子生物期待你的更多精彩 2013-07-27 11:13:38
这么大的蛋白不可能这么短的时间转上去的,如果没有接反电极建议220mA,2h.还有就是注意转膜时要加冰块降温,过高的温度会降低转膜效果。
成功,就是成为你想成为的人
10楼2013-07-26 20:49:22
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