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月影川雪

金虫 (初入文坛)

[求助] DNA shuffling

各位好，请问有做过DNA shuffling实验的虫子不？我基因组大概2600多，无引物PCR总是扩增不出来？
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1楼 2013-07-24 22:56:35
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-25 12:51:30
第一步，酶切的DNA的时候，回收多大的片段呀？要回收得浓一点。无引物PCR的退火温度一般是46度
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2楼2013-07-25 12:15:07
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月影川雪

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huanghznd at 2013-07-25 12:15:07
第一步，酶切的DNA的时候，回收多大的片段呀？要回收得浓一点。无引物PCR的退火温度一般是46度

第一步酶切晚大概是100-200bp的，我直接回收，需要胶回收吗？胶回收的话，几十bp的片段不就丢失了吗？谢谢
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3楼2013-07-25 14:57:21
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zhangzhilai

金虫 (正式写手)
无引物PCR得到的应该是一段弥散的条带，一般增加酶切小片段的量就可以，退火温度比常规PCR要低一些。
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4楼2013-07-25 16:31:18
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