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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】欢迎讨论——基因工程菌的构建
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hkfgwww

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】欢迎讨论——基因工程菌的构建 已有10人参与

现在正在学习如何构建一个基因工程菌。
大家谈谈对工程菌构建的看法。

目前实验室经诱变后的菌种产量已经很高，根据代谢流分析还有上升的空间，可是诱变的手段已经走到尽头。

所以打算用分子手段改造这株高产菌，大家有什么看法和建议啊。
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微生物发酵
1楼 2010-04-07 22:28:09
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dy_414

木虫 (正式写手)
hkfgwww(金币+1): 2010-04-07 22:40
从你现在的菌种中PCR出目的基因，构建新的工程菌，好与不好比较后下结论。
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我坚信，rp是攒出来的
2楼2010-04-07 22:35:07
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by dy_414 at 2010-04-07 22:35:07:
从你现在的菌种中PCR出目的基因，构建新的工程菌，好与不好比较后下结论。

我打算将这个菌里面酶活较低的那个酶（或者是限制产量进一步提高的关键酶）的编码基因定点突变，在将这个基因打到高产菌里面去，请问目前有成熟的方法吗？
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微生物发酵
3楼2010-04-07 22:42:34
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dy_414

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by hkfgwww at 2010-04-07 22:42:34:

我打算将这个菌里面酶活较低的那个酶（或者是限制产量进一步提高的关键酶）的编码基因定点突变，在将这个基因打到高产菌里面去，请问目前有成熟的方法吗？

这个我还真不大懂，不过个人觉得，不如拿到目的基因重新构建，有很多现成的方法。LZ的想法不错的，只是觉得有些太麻烦了。。。
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我坚信，rp是攒出来的
4楼2010-04-07 22:50:26
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by dy_414 at 2010-04-07 22:50:26:



这个我还真不大懂，不过个人觉得，不如拿到目的基因重新构建，有很多现成的方法。LZ的想法不错的，只是觉得有些太麻烦了。。。

恩，这种方法确实很多，但是很不实用。
但是现在将定点突变的基因导入到高产菌株的文章很多，但是方法大都不能复制，至少实验室不能复制，这个很郁闷。
再一次谢谢你的回答。
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微生物发酵
5楼2010-04-07 22:53:30
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
hkfgwww(金币+1): 2010-04-09 19:35
可以直接将限速基因整合进表达载体，用强启动子过表达试试。
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Thank-you，so-blue.
6楼2010-04-08 09:17:43
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yuanfeng

金虫 (小有名气)
hkfgwww(金币+1): 2010-04-09 00:01
如果是大肠杆菌类的，可以用同源重组的形式把突变后的基因替代原来的基因，但筛选可能比较麻烦。可以构建表达载体，省时、省力，效果也不错。
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7楼2010-04-08 10:59:45
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yuanfeng at 2010-04-08 10:59:45:
如果是大肠杆菌类的，可以用同源重组的形式把突变后的基因替代原来的基因，但筛选可能比较麻烦。可以构建表达载体，省时、省力，效果也不错。

可惜了不是大肠杆菌，是一种芽孢杆菌。
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微生物发酵
8楼2010-04-09 00:07:00
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匿名

用户注销 (著名写手)
hkfgwww(金币+1): 2010-04-09 19:32
本帖仅楼主可见
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9楼2010-04-09 06:50:02
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silicare

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优秀版主
★
scelab(金币+1): 2010-04-09 12:37
光整载体了，菌种的基因组变异还真没涉及，理论上可以是诱变和同源重组两种方式
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10楼2010-04-09 08:14:16
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