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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】欢迎讨论——基因工程菌的构建
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 彬心玉壶 at 2010-04-09 06:50:02:



如果是细菌的定点突变还是比较简单的。真菌不是很了解知道，你查一下定点突变的文章就知道了。技术算是很成熟了。
至少我知道有人通过同源交换做过。
祝好运！

定点突变容易，但是将定点突变的基因片段再转化进入生产菌很难啊，我想知道有什么好的方法没有。

例如化转和电转，化转很难，电转按理是可以的，但是实验室就是不能成功的导入，是不是载体有问题呢？
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微生物发酵
11楼2010-04-09 19:34:57
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
hkfgwww(金币+1): 2010-04-09 23:07
楼主应该 看看有关定向进化的论文。
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仕不可不弘毅，任重而道远
12楼2010-04-09 20:11:48
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 墨香若水 at 2010-04-09 20:11:48:
楼主应该 看看有关定向进化的论文。

恩，正在了解中，酶的定向进化。
还有，你对这个方向是如何理解的呢？
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微生物发酵
13楼2010-04-09 23:08:25
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墨香若水

木虫 (著名写手)

小小囧虫
★ ★
scelab(金币+2):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-10 12:05
hkfgwww(金币+1): 2010-04-10 16:53
引用回帖:
Originally posted by hkfgwww at 2010-04-09 23:08:25:



恩，正在了解中，酶的定向进化。
还有，你对这个方向是如何理解的呢？

课题跟定向进化有关，看了许多这方面的文献。突变方法很多，ep-pcr,DNA SHUFFLING等。ep-pcr比较适合初学者，定向进化最重要的是筛选，好的筛选方法决定一切。
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仕不可不弘毅，任重而道远
14楼2010-04-10 00:04:57
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todouhy

铜虫 (小有名气)
我研究生的时候要做的就是这个啊，还有一段时间来学习，所以我很希望大家能够给点意见，看什么方面的文献！
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15楼2010-04-11 10:02:17
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mhx102006

银虫 (小有名气)
hkfgwww(金币+1): 2010-04-11 12:13
你可以下载这个专利看看：一种腈水合酶基因工程菌的构建方法以及基因工程菌株的应用
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16楼2010-04-11 11:57:37
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by mhx102006 at 2010-04-11 11:57:37:
你可以下载这个专利看看：一种腈水合酶基因工程菌的构建方法以及基因工程菌株的应用

谢谢，我去找找
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微生物发酵
17楼2010-04-11 12:13:39
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by todouhy at 2010-04-11 10:02:17:
我研究生的时候要做的就是这个啊，还有一段时间来学习，所以我很希望大家能够给点意见，看什么方面的文献！

恩

[ Last edited by hkfgwww on 2010-4-15 at 19:47 ]
18楼2010-04-11 12:13:57
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hkfgwww

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by yuanfeng at 2010-04-08 10:59:45:
如果是大肠杆菌类的，可以用同源重组的形式把突变后的基因替代原来的基因，但筛选可能比较麻烦。可以构建表达载体，省时、省力，效果也不错。

哦
19楼2010-04-15 19:48:00
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yangjunzju

木虫 (正式写手)
hkfgwww(金币+1): 2010-04-16 21:16
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-04-08 09:17:43:
可以直接将限速基因整合进表达载体，用强启动子过表达试试。

这种方法貌似缺点有点多。。。
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20楼2010-04-15 23:32:52
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