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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 酶的分子改造，请达人指导，先谢谢了
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qwky2010

金虫 (著名写手)

[交流] 酶的分子改造，请达人指导，先谢谢了

大家好，我刚学习做这方面的实验，好多不懂，想请教下，我的重组酶最适温度稍微偏低，能否通过分子改造的途径提高一下，有方法最好了，真诚谢谢了啊
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1楼 2011-12-02 10:49:10
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回帖置顶 ( 共有1个 )

547star

木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
qwky2010(金币+1):谢谢参与
wanhscn(金币+3): 鼓励交流！ 2011-12-04 08:47:11
qwky2010(金币+5): 真诚谢谢啊 2011-12-04 10:47:07
qwky2010: 回帖置顶 2011-12-04 10:47:11
没什么基础的话,还是定向进化吧,这方面的资料,包括电子书,论坛应该有.话说回来,提高热稳定性的经验比较多,软件也是有的,自己找找吧.简单点来说,在现有半胱氨酸残基侧链对应的几个埃的范围内,且不是相同二级结构的残基,特别是非关键位点的,也突变一个半胱氨酸出来,以形成二硫键,就很有可能提高热稳定性了.减少酰胺类氨基酸,增加脯氨酸,消除疏水核心内非亲水性氨基酸等,好像也可以提高稳定性,久不看书,印象中是这样.
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11楼2011-12-04 01:08:09
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普通回帖

qwky2010

金虫 (著名写手)
   帮帮了 谢谢了
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2楼2011-12-03 11:26:22
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
qwky2010(金币+1):谢谢参与
qwky2010(金币+3): 谢谢啊 2011-12-03 17:06:06
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-12-03 22:23:08
这个好像很棘手，应该首先搞清楚酶的结构吧。再不行就通过比对寻找相似酶，看温度稳定酶跟该酶的区别，定点突变几个关键核苷酸试试。很简单的想法，可行性就不敢保证了。见笑！
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3楼2011-12-03 13:03:55
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alice

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
qwky2010(金币+1):谢谢参与
qwky2010(金币+3): 谢谢啊 2011-12-03 17:06:21
西瓜(金币+2): Good 2011-12-03 22:23:16
酶的序列什么的有吗，把结构搞清楚，对关键位置（折叠，卷区）的氨基酸替换，或同族酶氨基序列对照，找出突变位点，再改造！
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4楼2011-12-03 15:37:53
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dld123

版主 (文坛精英)
★
qwky2010(金币+1):谢谢参与
,不太懂！
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7楼2011-12-03 16:41:01
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qwky2010

金虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by alice at 2011-12-03 15:37:53:
酶的序列什么的有吗，把结构搞清楚，对关键位置（折叠，卷区）的氨基酸替换，或同族酶氨基序列对照，找出突变位点，再改造！

谢谢回复，核算序列有了，这样做有没有把握呢
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8楼2011-12-03 17:05:37
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qwky2010

金虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by joan198108 at 2011-12-03 13:03:55:
这个好像很棘手，应该首先搞清楚酶的结构吧。再不行就通过比对寻找相似酶，看温度稳定酶跟该酶的区别，定点突变几个关键核苷酸试试。很简单的想法，可行性就不敢保证了。见笑！

谢谢回复，有没有相关文献参考呀，这样做有没有把握呢谢谢
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9楼2011-12-03 17:07:01
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doublehelix

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
qwky2010(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+2): good 2011-12-03 22:23:39
qwky2010(金币+2): 真诚谢谢啊 2011-12-04 10:48:16
有 理性改造和非理性改造 两种策略可选，前者要有酶的结构信息，要有比较好的生物信息学知识，运用得当可以事倍功半；后者则不需要，如果没有相关结构信息那就选择后者，后者也即大家常说的定向进化 ，可选方法也比较多，如dna shuffling,交错延伸，error prone PCR...等
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10楼2011-12-03 20:07:01
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alice

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 有问题可以发帖，哈哈~祝实验顺利哦！ 2011-12-05 18:20:43
引用回帖:
8楼: Originally posted by qwky2010 at 2011-12-03 17:05:37:
谢谢回复，核算序列有了，这样做有没有把握呢

我现在在做的就是提高酶热稳定性方面的内容，就是按照对照其他热稳定性高的同族酶的序列进行氨基酸替换，或关键位置脯氨酸替换做的。我们课题组老师做的好像有些成效，我最近做的有些小问题，还没能验证～
你可以试试，参考文献应该也能找到吧
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12楼2011-12-05 10:31:23
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gxsun5楼
2011-12-03 16:12   回复  
qwky2010(金币+1):谢谢参与
ninger6楼
2011-12-03 16:38   回复  
qwky2010(金币+1):谢谢参与
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