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月影川雪

金虫 (初入文坛)

[求助] DNA shuffling

各位好,请问有做过DNA shuffling实验的虫子不?我基因组大概2600多,无引物PCR总是扩增不出来?
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huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-25 12:51:30
第一步,酶切的DNA的时候,回收多大的片段呀?要回收得浓一点。无引物PCR的退火温度一般是46度
2楼2013-07-25 12:15:07
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月影川雪

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huanghznd at 2013-07-25 12:15:07
第一步,酶切的DNA的时候,回收多大的片段呀?要回收得浓一点。无引物PCR的退火温度一般是46度

第一步酶切晚大概是100-200bp的,我直接回收,需要胶回收吗?胶回收的话,几十bp的片段不就丢失了吗?谢谢
3楼2013-07-25 14:57:21
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zhangzhilai

金虫 (正式写手)

无引物PCR得到的应该是一段弥散的条带,一般增加酶切小片段的量就可以,退火温度比常规PCR要低一些。
4楼2013-07-25 16:31:18
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