应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » EMSA/ChIP » EMSA实验问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 3916  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

...山雨

新虫 (初入文坛)

[求助] EMSA实验问题

最近在做EMSA实验，请教一个问题：做这个实验跑非变性胶时为啥不用考虑蛋白质的等电点呢，无论是酸性蛋白还是碱性蛋白都是用pH8.3的缓冲液？

[ Last edited by silicare on 2014-2-26 at 16:32 ]
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物科学系列

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-24 21:49:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-24 23:16:09
...山雨: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-07-25 17:43:35
只要你蛋白不沉淀就没事吧.
我理解EMSA是看的DNA或者RNA,只要DNA或者RNA结合到蛋白上,整个复合体就会带负电荷.因为DNA或者RNA的磷酸基团带有大量负电荷,蛋白的酸性碱性比起来不算什么.而且在大部分EMSA里只能看到Free DNA和Bound DNA的条带,所以不在乎只有蛋白的条带会跑到哪里.
赞一下(1人) 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
2楼2013-07-24 22:28:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

beimi

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-25 12:48:56
...山雨: 金币+7, ★★★很有帮助 2013-10-29 10:59:27
...山雨: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-10-29 10:59:52
First if you use the denature gel the protein and DNA will separate, so then all the samples are the same. so you do not know your protein bind to your DNA or not.
second, it is not need to consider protein PI, because of shit you will know the binding of your protein to the DNA of interest. If you get the shit, that means your get the results, of course you should do some negative control.

good luck!
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-25 01:50:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

...山雨

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by beimi at 2013-07-25 01:50:29
First if you use the denature gel the protein and DNA will separate, so then all the samples are the same. so you do not know your protein bind to your DNA or not.
second, it is not need to consider ...

谢谢
回复此楼
4楼2013-07-25 17:47:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冰岛硫化叶菌

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2013-07-24 22:28:21
只要你蛋白不沉淀就没事吧.
我理解EMSA是看的DNA或者RNA,只要DNA或者RNA结合到蛋白上,整个复合体就会带负电荷.因为DNA或者RNA的磷酸基团带有大量负电荷,蛋白的酸性碱性比起来不算什么.而且在大部分EMSA里只能看到F ...

我有一个疑问就是，不仅是ESMA跑胶过程中的buffer是碱性，在DNA与蛋白孵育的过程中的binding buffer也是碱性的，那么在蛋白和DNA结合的这个过程中，蛋白质如果是中性的或者是酸性的，那么就是带负电，那么蛋白怎么与带负电的DNA结合呢？因为我的实验中现在遇到这个问题，蛋白等电点是7.5,EMSA试验中检测不到shift条带，且存在很明显的堵孔现象。但footfrinting实验是能检测到有明确的结合位点的。
赞一下 回复此楼
5楼2017-03-25 19:27:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ...山雨 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 331求调剂 +3 luoxin0706. 2026-04-08 3/150 2026-04-08 17:20 by -迷了路啊路
[考研] 一志愿吉大化学327求调剂 +12 王王白石 2026-04-06 13/650 2026-04-08 16:05 by luoyongfeng
[考研] 一志愿0703化学招61最终排名62化学求调剂 +12 招61排名62 2026-04-07 13/650 2026-04-08 15:00 by heqizheng
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-06 11/550 2026-04-08 11:26 by Evan_Liu
[考研] 求调剂 +13 熊二想上岸 2026-04-04 13/650 2026-04-08 10:33 by 不吃魚的貓
[考研] 0703化学调剂325分 +13 15771691647 2026-04-04 14/700 2026-04-08 10:28 by screening
[考研] 263分B区求调剂 +6 李nihao 2026-04-08 6/300 2026-04-08 09:38 by 南开小綦
[考研] 388求调剂 +6 四川王涛 2026-04-07 8/400 2026-04-08 00:17 by JourneyLucky
[考研] 288环境专硕,求调材料方向 +35 lllllos 2026-04-04 39/1950 2026-04-07 23:24 by 一只好果子?
[考研] 22408 调剂材料 +7 我叫ez 2026-04-06 8/400 2026-04-07 17:12 by 蓝云思雨
[考研] 材料求调剂 +18 一样YWY 2026-04-05 18/900 2026-04-07 15:49 by dxlg
[考研] 277工科求调剂 +10 1915668 2026-04-04 11/550 2026-04-06 23:53 by 心媛意北
[考研] 08600生物与医药-327 +9 18755400796 2026-04-05 9/450 2026-04-06 22:35 by 52305043001
[考研] 一志愿C9的化学工程（085602） 340分，感觉校内调剂无望，求调剂 +12 万事宜臻 2026-04-04 12/600 2026-04-06 07:46 by 无际的草原
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +10 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-04 10/500 2026-04-05 18:51 by 蓝云思雨
[考研] 电子信息调剂交叉学科有推荐吗 +6 jhtfeybgj 2026-04-01 9/450 2026-04-05 11:13 by 猪会飞
[考研] 调剂 +5 asdasdassda 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:27 by 岸上的一条鱼
[考研] 289-求调剂 +4 这里是_ 2026-04-03 4/200 2026-04-03 14:23 by 1753564080
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 13:03 by yulian1987
[考研] 270调剂 +7 maxjxbsk 2026-04-02 7/350 2026-04-02 09:50 by yulian1987
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭