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lmcyjxs金虫 (正式写手)
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抑制差减杂交（SSH）的RNA纯化要求
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如题，我想做抑制差减杂交（SSH）发现空白与与处理组的差异基因。但是这个RNA要求就很高。我看过相关文献及使用说明书，知道它用量大，且质量要好。 但是关于RNA纯化这一块，在纯化得到mRNA之前，是否需要先用DNA消化酶消化掉DNA再去纯化mRNA比较好？如果提取得到总RNA后，直接过柱纯化得到mRNA，省掉消化DNA那步，会对mRNA的质量有很大影响吗？mRNA纯化，另外有无比较好的牌子推荐下呢？ |
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lmcyjxs
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【答案】应助回帖
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我也是刚做完SSH。 总结一下，还是RNA这块最关键了。。关系到这个文库的质量好坏。 首先：RNA肯定的是mRNA，总RNA什么的肯定不行，即使做出来文库，也是垃圾序列居多，没有什么价值。mRNA分离我用的是磁珠法，promego公司的，挺便宜的，质量也不错，因为SSH起始RNA量大嘛，所以没有跑电泳，做完反转录之后才检查cDNA的质量，弥散，质量还可以，之前一直也是各种担心，因为肉眼很难看到，mRNA有没有提出来啊，反转录之后离心，能看到一点点的小沉淀的。。。如果DNA组明显多的话，还是得加DNase消化的，对RNA影响不大。。。 正在做后续的实验，做SSH的小虫貌似不多，希望能互相交流。。。做久了感觉心好累。。。感觉不会再做SSH了，老板今儿又说再做一个文库。。。。。 |
6楼2013-09-16 23:25:32
lmcyjxs
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以后多多请教啦！ 7楼2013-09-17 20:47:37
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40