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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

[求助] 抑制差减杂交(SSH)的RNA纯化要求

如题,我想做抑制差减杂交(SSH)发现空白与与处理组的差异基因。但是这个RNA要求就很高。我看过相关文献及使用说明书,知道它用量大,且质量要好。   
    但是关于RNA纯化这一块,在纯化得到mRNA之前,是否需要先用DNA消化酶消化掉DNA再去纯化mRNA比较好?如果提取得到总RNA后,直接过柱纯化得到mRNA,省掉消化DNA那步,会对mRNA的质量有很大影响吗?mRNA纯化,另外有无比较好的牌子推荐下呢?
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思路决定出路。。。
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哈啦啦2012

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主好!我最近也在做SSH,接头连接这块出现问题了,我买的试剂盒里没有做两次PCR需要的酶,我用SMART RACE试剂盒里的酶做,第一次PCR结果啥都没出来,接头连接效率也啥都没出来,好头疼啊,不知道是接头没连接上,还是酶的问题,用这个酶做普通的PCR能P出条带来。我酶切后纯化的ds cDNA检测了有条带啊。不知道到底哪里出问题了。希望能互相交流学习下吧。
8楼2013-11-06 17:09:30
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)


kx444555: 金币+1, 鼓励交流,静待高手来 2013-07-23 15:48:30
发现最近我发的帖子都没人回复的?
思路决定出路。。。
2楼2013-07-23 14:32:36
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
lmcyjxs: 金币+2, 有帮助, 总算有人回复了,谢谢。那有去总RNA中的DNA吗?其实,我是看到很多人都纯化了,但是另一方面想,纯化后,RNA的种类难免就会损失,因此纠结中。。。 2013-07-23 18:21:59
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-17 20:50:16
以前用总RNA都能做出来,不需要纯化出mRNA
3楼2013-07-23 16:32:56
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-17 20:50:02
哦,对了,还有就是貌似用kit提的RNA
4楼2013-07-23 16:34:33
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