| 查看: 1297 | 回复: 7 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
lmcyjxs金虫 (正式写手)
|
[求助]
抑制差减杂交（SSH）的RNA纯化要求
|
||
|
如题，我想做抑制差减杂交（SSH）发现空白与与处理组的差异基因。但是这个RNA要求就很高。我看过相关文献及使用说明书，知道它用量大，且质量要好。 但是关于RNA纯化这一块，在纯化得到mRNA之前，是否需要先用DNA消化酶消化掉DNA再去纯化mRNA比较好？如果提取得到总RNA后，直接过柱纯化得到mRNA，省掉消化DNA那步，会对mRNA的质量有很大影响吗？mRNA纯化，另外有无比较好的牌子推荐下呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有114人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 中草药生物技术-唐克轩
已经有133人回复
- 如何提取水稻黄单胞菌的总RNA和纯化mRNA
已经有4人回复
- 做抑制差减杂交SSH都需要买哪些试剂盒？
已经有3人回复
- 能否用DNA纯化试剂盒来纯化提取的RNA
已经有4人回复
随波逐刘
新虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 91.2
- 散金: 8
- 帖子: 63
- 在线: 36.7小时
- 虫号: 1455710
- 注册: 2011-10-22
- 性别: GG
- 专业: 中药质量评价
【答案】应助回帖
|
我也是刚做完SSH。 总结一下，还是RNA这块最关键了。。关系到这个文库的质量好坏。 首先：RNA肯定的是mRNA，总RNA什么的肯定不行，即使做出来文库，也是垃圾序列居多，没有什么价值。mRNA分离我用的是磁珠法，promego公司的，挺便宜的，质量也不错，因为SSH起始RNA量大嘛，所以没有跑电泳，做完反转录之后才检查cDNA的质量，弥散，质量还可以，之前一直也是各种担心，因为肉眼很难看到，mRNA有没有提出来啊，反转录之后离心，能看到一点点的小沉淀的。。。如果DNA组明显多的话，还是得加DNase消化的，对RNA影响不大。。。 正在做后续的实验，做SSH的小虫貌似不多，希望能互相交流。。。做久了感觉心好累。。。感觉不会再做SSH了，老板今儿又说再做一个文库。。。。。 |
6楼2013-09-16 23:25:32
lmcyjxs
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 1088.2
- 散金: 119
- 红花: 7
- 帖子: 954
- 在线: 124.3小时
- 虫号: 1255578
- 注册: 2011-04-05
- 性别: MM
- 专业: 中药资源
2楼2013-07-23 14:32:36
3楼2013-07-23 16:32:56
4楼2013-07-23 16:34:33
