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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 抑制差减杂交（SSH）的RNA纯化要求
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

[求助] 抑制差减杂交（SSH）的RNA纯化要求

如题，我想做抑制差减杂交（SSH）发现空白与与处理组的差异基因。但是这个RNA要求就很高。我看过相关文献及使用说明书，知道它用量大，且质量要好。   
    但是关于RNA纯化这一块，在纯化得到mRNA之前，是否需要先用DNA消化酶消化掉DNA再去纯化mRNA比较好？如果提取得到总RNA后，直接过柱纯化得到mRNA，省掉消化DNA那步，会对mRNA的质量有很大影响吗？mRNA纯化，另外有无比较好的牌子推荐下呢？
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思路决定出路。。。
1楼 2013-07-22 16:45:59
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 随波逐刘 at 2013-09-16 23:25:32
我也是刚做完SSH。
总结一下，还是RNA这块最关键了。。关系到这个文库的质量好坏。
首先：RNA肯定的是mRNA，总RNA什么的肯定不行，即使做出来文库，也是垃圾序列居多，没有什么价值。mRNA分离我用的是磁珠法，pro ...

谢谢这位虫友的热心交流帮助！真心表示很能理解你的心情~加油！祝你一切顺顺利利的！以后多多请教啦！
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思路决定出路。。。
7楼2013-09-17 20:47:37
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流,静待高手来 2013-07-23 15:48:30
发现最近我发的帖子都没人回复的？
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思路决定出路。。。
2楼2013-07-23 14:32:36
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lmcyjxs: 金币+2, ★有帮助, 总算有人回复了，谢谢。那有去总RNA中的DNA吗？其实，我是看到很多人都纯化了，但是另一方面想，纯化后，RNA的种类难免就会损失，因此纠结中。。。 2013-07-23 18:21:59
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-17 20:50:16
以前用总RNA都能做出来，不需要纯化出mRNA
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3楼2013-07-23 16:32:56
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hyphen007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-17 20:50:02
哦，对了，还有就是貌似用kit提的RNA
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4楼2013-07-23 16:34:33
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