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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助——酶切结果分析
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渭水凡夫

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助——酶切结果分析


AvaII 内切酶 37度 4小时
15ul 体系  ：10XNEB缓冲液  1.5ul
                    PCR产物        4ul
                   内切酶          0.2ul
                   灭菌双蒸水      9.3ul

求指教啊  条带怎么是这样难看啊
求助——酶切结果分析
酶切20.Jpg

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-23 at 07:52 ]
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平静的水和不叫的狗是最可怕的
1楼 2013-07-21 00:19:04
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-21 07:49:30
1949stone: 金币+1, 同意 2013-07-23 07:52:58
感觉那些位置低的是酶切成功的, 只是胶跑得不好看. 建议提高胶的浓度, 跑胶时电压小一点(如90V).
楼主你这个什么都不标注让别人实在难懂, 强烈要求说明每条泳道的定义.
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-07-21 01:15:22
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普通回帖

zx1990

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-21 23:08:50
你这个应该是没有酶切出来的，如果酶切成功的话，不应该只有一个片段的。我觉得可以换一种酶试试，你做的是什么基因？
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3楼2013-07-21 12:14:52
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oylb

禁言 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-21 23:09:03
1949stone: 和一楼所见略同 2013-07-23 07:53:39
本帖内容被屏蔽
4楼2013-07-21 14:21:33
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hjjzoe

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-21 23:09:11
没P出来，那些都是引物二聚体，也就无所谓且酶切成了。
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5楼2013-07-21 21:09:26
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渭水凡夫

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-07-21 01:15:22
感觉那些位置低的是酶切成功的, 只是胶跑得不好看. 建议提高胶的浓度, 跑胶时电压小一点(如90V).
楼主你这个什么都不标注让别人实在难懂, 强烈要求说明每条泳道的定义.

您对酶切的跑胶有啥心得？
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平静的水和不叫的狗是最可怕的
6楼2013-07-21 22:33:08
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bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-21 23:09:19
如果是用普通浓度的胶和正常的一样, 没有什么要特别注意的. 但是如果你要用浓度比较高的胶(比方说你想看500bp和520bp的区别, 这时要用3.5%附近), 跑胶时缓冲液一定要用新的, 电压一定要开低些. 这样的目的是让整个过程少产生热量, 以及让热量均匀分布, 不然很容易跑成斜线, 波浪线.
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7楼2013-07-21 22:54:37
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Sthunder

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先你没注明你酶切的样品是什么（PCR产物还是载体），同时没说明你酶切产物的大小，所以很难说。
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互助互励，共奋共进！！
8楼2013-07-22 05:46:38
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xz2001199802

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
明显PCR没P出来，跟酶切没关系，去检查你的PCR吧
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越学越无知
9楼2013-07-22 18:37:54
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渭水凡夫

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-07-21 22:54:37
如果是用普通浓度的胶和正常的一样, 没有什么要特别注意的. 但是如果你要用浓度比较高的胶(比方说你想看500bp和520bp的区别, 这时要用3.5%附近), 跑胶时缓冲液一定要用新的, 电压一定要开低些. 这样的目的是让整个过 ...

能不能解释一下 为什么要用高浓度的胶呢？
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平静的水和不叫的狗是最可怕的
10楼2013-07-22 22:23:53
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