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hwchen2000金虫 (正式写手)
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[求助]
单条3-race通用引物扩增出5-6个条带，有没有
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各位大侠，最近在做PCR，本来是想做3-race的，没做出来，后来受坛子里的一个虫友启发，只用巢式引物和3-通用引物扩增出6个条带，结果测序结果回来不可思议，上游引物居然就是3-通用引物的互补序列，下游引物就是3-通用引物，后来用3-通用引物做单引物扩增，这6个条带居然全扩出来，真是奇葩了，有没有筒子能解释一下啊 3-通用引物5'-GCTGTCAACGATACGCTACGTAACGGCATGACAGTG (T)18-3' |
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bullfrog325
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-20 21:46:21
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巢式PCR第一轮的时候如果有非特异的引物/模板结合, 这种PCR产物就会在第二轮继续被扩增. 楼主的第一轮巢式PCR温度太低了. 通用引物里面的poly-T和模板末端的poly-A(对应原来mRNA的poly-A)这种结合是你希望发生的, 但是如果有某个cDNA中间也有和poly-A相似序列, 你的通用引物也可以勉强集合上, 只要这个发生就会给下面的PCR提供模板. |
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hwchen20002楼2013-07-20 18:43:42
hwchen2000
金虫 (正式写手)
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3楼2013-07-22 10:33:57