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AlbaRosea金虫 (初入文坛)
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PCAMBIA1300系列载体表达初始ATG
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各位大侠、 请问一下就是pCAMBIA1301,1304等几个载体里边。顺时针的35s启动子下游，是从哪里的ATG开始读的呀？如果用ncoI 和bgl II 是不是都是从NCO I 的ATG开始读的呀？那么如果用这两个酶切位点，是不是都要在目标序列里补上两个碱基啊才能保证不会移码啊？（ 1 catggtagat ctgactagta aaggagaaga，摘自http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/AF234298） 生物基础薄弱啊。忘高人指点一下啊。谢谢。 |
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 生物科学系列 |
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【答案】应助回帖
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AlbaRosea: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢。。太谢谢了。。 2013-07-13 16:12:49
AlbaRosea: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢。。太谢谢了。。 2013-07-13 16:12:49
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linker有很多种，就是短小的序列不形成高级折叠，使融合蛋分别独立折叠。常用的有甘氨酸linker。构建载体的时候往往在插入的位点与要融合的标签直接有一些碱基，所以通常情况下不做任何处理也往往可以成功表达出融合蛋白。我只是提醒一下而已。 目的基因前面加两个碱基一般是比较随意的，只要不形成终止子或者Pro这种对蛋白折叠构象发生较大影响的氨基酸就可以了。表达出来的蛋白比原来的目标蛋白多两个氨基酸，你的ATG可以保留。多两个氨基酸一般不会对蛋白的结构和功能造成什么影响。 |
6楼2013-07-13 09:18:19
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