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running113

木虫 (著名写手)

[求助] 两次电泳,少了个条带,求解答原因。

跑了两次双酶切质粒的电泳。
marker使用的是takara 15000。
第一次出的来的条带有一个1500bp左右的条带。
第二次再用相同的双酶切质粒跑电泳,发现1500bp左右的条带不见了。
不知各位没有没遇到过这种情况?两次电泳相关两天。

双酶 marker 单酶
(S、E) EcoRI
两次电泳,少了个条带,求解答原因。
上图是第一次电泳结果。marker左侧是双酶切,右侧为单酶切,条带最前端均出现一短碱基(约1500bp)条带。
并且双酶切道中最后面的条带明显比前两条亮。

单酶 单酶 单酶 双酶 marker
EcoRI EcoRI SpnI (S、E)
两次电泳,少了个条带,求解答原因。-1
上图为第二次电泳的结果,marker左面第一条是双酶切结果,两条带,且亮度差不多,未出现1500bp碱基。
为了对比,在最左侧泳道中加入第一次电泳图中marker右侧那个泳道相同的酶切质粒,也没有出现1500bp碱基。
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
running113(myprayer代发): 金币+1, Gifts of roses, hand there are lingering fragrance. Look forward to your wonderful and more detailed answer. 2013-06-24 10:35:31
理论上质粒应该切出什么样的情况?可能是两次酶切条件不同造成酶有星活性。
2楼2013-06-23 23:27:46
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