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776142

金虫 (正式写手)

[求助] 关于碱法裂解提取DNA

在使用合成的材料做大肠杆菌提取DNA的实验时，使用2ml pYD1的质粒在250bp以下处总出现亮带，OD值大于2.0，酶标仪测定含量得到了30微克，而用试剂盒才得到了6微克左右。操作过程中使用的是碱法裂解溶液1,2,3，都经过灭菌处理，而且严格按照冰浴、温和操作和时间控制等，然后12000g离心得到上清液，加入到我的萃取材料中振荡吸附，用1M的氯化钠洗脱，再加入2.5倍的乙醇沉淀-20度30分钟，20微升无菌水溶解。并且在加完溶液1,2，3后离心得到的上清液的OD值也在2.1左右，这里不知道对不对，希望有懂的同学帮助一下。曾经得到过正确的结果电泳图下方无杂带，OD值1.91得到了5微克，就是一直没重复出来。
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1楼 2013-06-18 08:34:12
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德国工兵铲

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
776142(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更详细的解答。 2013-06-18 10:52:17
一般DNA OD值偏大是因为RNA没有除干净
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2楼2013-06-18 09:02:28
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776142

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 德国工兵铲 at 2013-06-18 09:02:28
一般DNA OD值偏大是因为RNA没有除干净

在提取过程中DNA有降解吗？ 我在溶液1中加入了100微克每微升的酶，最后在溶解DNA沉淀的水中加入些能完全解决这个问题吗
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3楼2013-06-18 09:16:18
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