| 查看: 979 | 回复: 1 | ||
[求助]
关于体外转录的模板问题！急！
|
|
我最近在做体外转录，用的是Promega的 T7 RiboMAX Express Large Scale RNA Production System Protocol。线性化的质粒体外转录后只用Dnase处理，并没有再做纯化，直接冻存-70。以Nuclease-Free Water做Blank用NanoDrop2000测得RNA浓度为14015.9ng/μl，260/280是1.86,260/230是2.17。这个浓度是不是高得不正常啊？为什么会这么高呢? 还有，我在20μf反应l体系中加了2μl该RNA，进行探针法一步法RT-PCR，所做的不加反转录酶混合物的对照也在25个循环后出现了扩增曲线，这是不是说明我的RNA模板中还含有残余DNA呢？我如果要用体外转录的RNA做标准品的话，是不是必须不能含有一丁点DNA呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有182人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 使用多对引物进行实时定量PCR后未得到实验结果，是否能说明目的基因不表达？
已经有10人回复
- UTR区域的遗传来源
已经有3人回复
- 反转录后用cDNA做模板扩不出目的基因怎么办？？？
已经有6人回复
- QPCR模板RNA逆转录为CDNA后，CT值过大
已经有7人回复
- 实时定量模板统一量是提材料 or RNA初始量 or 反转录后的cDNA量一样？
已经有6人回复
- 构质粒P基因全长的时候用逆转录的模板P不出来，可以提DNA来P吗？？
已经有5人回复
- RT-PCR逆转录加模板问题
已经有9人回复
- 模板浓度高会影响反转录结果吗?
已经有4人回复
- 【求助/交流】体外转录11kb的片段用哪个公司的试剂比较好？
已经有11人回复
- 【求助/交流】关于体外转录的模板
已经有8人回复
- 【求助/交流】关于PCR的问题
已经有18人回复
2楼2013-07-15 15:59:31