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关于体外转录的模板问题！急！
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我最近在做体外转录，用的是Promega的 T7 RiboMAX Express Large Scale RNA Production System Protocol。线性化的质粒体外转录后只用Dnase处理，并没有再做纯化，直接冻存-70。以Nuclease-Free Water做Blank用NanoDrop2000测得RNA浓度为14015.9ng/μl，260/280是1.86,260/230是2.17。这个浓度是不是高得不正常啊？为什么会这么高呢? 还有，我在20μf反应l体系中加了2μl该RNA，进行探针法一步法RT-PCR，所做的不加反转录酶混合物的对照也在25个循环后出现了扩增曲线，这是不是说明我的RNA模板中还含有残余DNA呢？我如果要用体外转录的RNA做标准品的话，是不是必须不能含有一丁点DNA呢？ |
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2楼2013-07-15 15:59:31
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