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...山雨

新虫 (初入文坛)

[求助] inverse PCR 技术

求助:做反向pcr克隆启动子巨多日毫无结果。不知哪位同学做过反向pcr,有没有具体的实验操作流程(酶切和环化的具体细节方面),麻烦上传一下。谢谢啦。
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piaofu

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-03 14:06:18
...山雨: 金币+15, ★★★很有帮助 2013-10-29 10:56:29
如果用反向PCR不能做出来的话,建议用Tail PCR,希望对你有帮助!
3楼2013-08-03 10:43:06
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sunnyboylg

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1949stone: 金币+2, 鼓励 2013-06-09 14:18:57
1949stone: 你的头像我很喜欢啊 2013-06-09 14:20:02
...山雨: 金币+15, ★★★很有帮助 2013-10-29 10:56:17
反向PCR的目的在于扩增一段已知序列旁侧的DNA,也就是说这一反应体系不是在一对引物之间而是在引物外侧合成DNA。反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色体序列,因此又称为染色体步移。这时选择的引物虽然与核心DNA两末端序列互补,但引物3’端是相互反向的。
反向PCR的操作流程:扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA,然后用DNA连接酶连接成一个环状分子,通过反向PCR扩增引物的上游片段和下游片段。
楼主加油!
要么读书,要么旅行,身体和灵魂,必须有一个在路上
2楼2013-06-09 11:55:25
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...山雨

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by piaofu at 2013-08-03 10:43:06
如果用反向PCR不能做出来的话,建议用Tail PCR,希望对你有帮助!

谢谢,试试去
4楼2013-08-05 09:04:43
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