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...山雨

新虫 (初入文坛)

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[求助] inverse PCR 技术

求助：做反向pcr克隆启动子巨多日毫无结果。不知哪位同学做过反向pcr，有没有具体的实验操作流程（酶切和环化的具体细节方面），麻烦上传一下。谢谢啦。

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1楼 2013-06-09 11:07:13

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

sunnyboylg

木虫 (正式写手)

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【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
1949stone: 金币+2, 鼓励 2013-06-09 14:18:57
1949stone: 你的头像我很喜欢啊 2013-06-09 14:20:02
...山雨: 金币+15, ★★★很有帮助 2013-10-29 10:56:17

反向PCR的目的在于扩增一段已知序列旁侧的DNA，也就是说这一反应体系不是在一对引物之间而是在引物外侧合成DNA。反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色体序列，因此又称为染色体步移。这时选择的引物虽然与核心DNA两末端序列互补，但引物3’端是相互反向的。
反向PCR的操作流程：扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA，然后用DNA连接酶连接成一个环状分子，通过反向PCR扩增引物的上游片段和下游片段。
楼主加油！