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zhangfeibird

铜虫 (小有名气)

[求助] SV40大T抗原克隆

请问我们实验室现在有293T细胞,我能否提取细胞总RNA,反转录,然后克隆SV40大T抗原?
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唐朝豪放男

铜虫 (小有名气)

完全可以,万恶15字
2楼2013-06-09 09:53:05
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zhangfeibird

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 唐朝豪放男 at 2013-06-09 09:53:05
完全可以,万恶15字

请问反转录模板有什么要求么?我试了2次都没有条带啊?
3楼2013-06-09 16:21:00
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唐朝豪放男

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-09 21:53:59
zhangfeibird: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2013-06-10 13:30:55
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangfeibird at 2013-06-09 16:21:00
请问反转录模板有什么要求么?我试了2次都没有条带啊?...

没有特殊要求吧,你给的信息太少了,RNA的质量、反转录试剂盒、引物的设计等等各种原因都对结果有影响。私自猜测,也是我犯过的错误,就是做反转的时候Oligo dT和随机六引物全都加了,需要全长的cDNA的话不要加随机六引物
4楼2013-06-09 17:13:58
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zhangfeibird

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 唐朝豪放男 at 2013-06-09 17:13:58
没有特殊要求吧,你给的信息太少了,RNA的质量、反转录试剂盒、引物的设计等等各种原因都对结果有影响。私自猜测,也是我犯过的错误,就是做反转的时候Oligo dT和随机六引物全都加了,需要全长的cDNA的话不要加随机 ...

谢谢,我的已经克隆出来了,正在连接中。不过第一次可能没连上。
5楼2013-06-12 09:54:19
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