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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SV40大T抗原克隆
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zhangfeibird

铜虫 (小有名气)

[求助] SV40大T抗原克隆

请问我们实验室现在有293T细胞，我能否提取细胞总RNA，反转录，然后克隆SV40大T抗原？
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1楼2013-06-08 22:33:04
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唐朝豪放男

铜虫 (小有名气)
完全可以，万恶15字
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2楼2013-06-09 09:53:05
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zhangfeibird

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 唐朝豪放男 at 2013-06-09 09:53:05
完全可以，万恶15字

请问反转录模板有什么要求么？我试了2次都没有条带啊？
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3楼2013-06-09 16:21:00
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唐朝豪放男

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-09 21:53:59
zhangfeibird: 金币+5, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2013-06-10 13:30:55
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhangfeibird at 2013-06-09 16:21:00
请问反转录模板有什么要求么？我试了2次都没有条带啊？...

没有特殊要求吧，你给的信息太少了，RNA的质量、反转录试剂盒、引物的设计等等各种原因都对结果有影响。私自猜测，也是我犯过的错误，就是做反转的时候Oligo dT和随机六引物全都加了，需要全长的cDNA的话不要加随机六引物
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4楼2013-06-09 17:13:58
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zhangfeibird

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 唐朝豪放男 at 2013-06-09 17:13:58
没有特殊要求吧，你给的信息太少了，RNA的质量、反转录试剂盒、引物的设计等等各种原因都对结果有影响。私自猜测，也是我犯过的错误，就是做反转的时候Oligo dT和随机六引物全都加了，需要全长的cDNA的话不要加随机 ...

谢谢，我的已经克隆出来了，正在连接中。不过第一次可能没连上。
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5楼2013-06-12 09:54:19
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